刘都户1, 张学庸1, 黄裕新2
(1 第四军医大学西京医院消化科, 2 唐都医院消化科, 陕西西安710033)
摘 要 目的: 探讨V EGF 在固体肿瘤生长、进展、转移过程中的作用为通过阻断V EGF 与其受体KDR 的作用治疗肿瘤提供依据. 方法: 采用免疫组织化学ABC 法对50 例人胃癌组织中的血管内皮生长因子(V EGF) 及其受体(KDR) 的定位与分布进行研究. 结果: 50% 的胃癌组织表达V EGF, 阳性物质主要位于肿瘤细胞胞膜及胞浆, KDR 染色阳性物质主要位于癌组织及癌组织旁的血管内皮细胞上. ? , ì 期胃癌组织V EGF 的阳性率(66. 67% , 12?18; 81. 82% , 9?11) 均高于é ,ê 期的胃癌组织(20% , 2?10; 18. 18% , 2?11) (P < 0. 05) ; 不同组织类型的V EGF 阳性表达率无差异; 胃癌组织伴发淋巴结转移或肝转移的V EGF 阳性率( 67. 74% , 21?31; 100% , 0?6 )明显高于未发生转移的胃癌组织(21. 05% , 4?19; 43. 18% ,19?44) (P < 0. 05) ; 胃癌组织V EGF 的表达与肿瘤浸润及浆膜有关.结论: V EGF 与其受体KDR 的作用在胃癌的生长、进展和转移中可能有重要作用.
0 引言
实验表明, 恶性实体肿瘤的生长必须依赖新生血管持续不断地为其提供营养和排除代谢产物. 近年来, 许多促血管生长因子已得到确认, 血管内皮生长因子V EGF 有很强的促血管生成作用, 且对血管生成中关键环节— 血管内皮细胞的持续增殖有着无可替代的直接作用. 本实验旨在对不同进展期胃癌组织的V EGF 及其受体KDR 的表达与分布进行研究.
1 材料和方法
1. 1 临床标本来源及切片制备 50 例胃癌组织标本来自第四军医大学附属医院外科手术住院患者. 年龄27 岁～ 76 岁(平均56. 34 岁) , 男40 例, 女10 例,所有患者术前均未接受化疗或放疗. 标本按组织学类型分成两组, 一组为分化组, 包括乳头状腺癌和管状腺癌, 另一组为未分化组, 包括低分化腺癌, 印戒细胞癌及粘液腺癌. 所有标本均用100 g?L 甲醛固定24 h, 常规石蜡包埋, 制备5 Lm 厚连续切片, 贴附于涂有5 g?L 铬矾明胶的载玻片上. 对每例胃癌组织切片分别用抗V EGF 和抗FL K21?KDR 的多克隆抗体进行免疫组织化学染色, 并作常规HE 染色.
1. 2 兔抗V EGF 抗体和兔抗FL K21?KDR 抗体由San ta Cruz 公司提供. 卵白素2生物素化过氧化物酶复合物(ABC) 试剂盒购自华美生物工程公司. 3, 3’2二氨基联苯胺(DAB) 为美国Sigm a 公司产品.
1. 3 免疫组织化学染色 主要步骤: ①5 Lm 厚切片经间2二甲苯脱蜡, 梯度酒精水化. 3 g?L 甲醇双氧水孵育30m in. ②20 g?L 正常羊血清封闭背景30m in.③分别加V EGF 或FL K21?KDR 抗血清, 4 ℃孵育16 h. ④ 生物素化二抗室温孵育2 h. ⑤ABC 复合物室温孵育1 h. ⑥DAB2H2O 2 显色8 m in. ⑦脱水、透明、中性树胶封片.分别用15 g?L 正常兔血清和0. 01 mo l?L PBS取代第一抗体进行孵育, 作为替代对照和空白对照.肿瘤细胞内出现棕黄色颗粒为阳性, 根据染色强度不同分为(- ) , (±) , (+ ) 和(6 ) 四级, 肿瘤内染色强度达到或超过(+ ) 者为表达阳性; (±) 和(- ) 为阴性.
1. 4 统计学处理 用V2 检验法.
2 结果
2. 1 50 例胃癌临床病理学特征及病理组织学分级以全国胃癌协作组规定作为病理诊断, 分期用TNM 国际统一分期法. 结果见Tab 1. 病理组织学发现, 有10 例胃癌的同一组织切片内有两种不同类型的癌细胞存在, 大多为低分化腺癌并粘液细胞癌.
表1 50 例胃癌临床病理学特征及其与V EGF 表达之间的关系
2. 2 V EGF 及其受体KDR 在胃癌组织中的定位与分布特点 尸检正常胃组织及空白和替代对照切片中均未见免疫反应阳性信号. 在癌组织中及癌旁周围组织, V EGF 及KDR 免疫反应阳性物质呈棕褐色, 细颗粒状, 背景不着色或略显淡黄色, 阳性细胞容易辨认, 在癌组织中,V EGF 阳性物质主要位于癌细胞的胞膜和(或) 胞浆(F ig 1) , 其中, 肿瘤组织的边缘细胞染色要强于中心组织, 一些内皮细胞上也可见弱的V EGF 染色. 50 例胃癌组织V EGF 阳性表达率为50%. KDR 阳性物质主要位于癌组织及癌组织周围的血管内皮细胞上. 在50 例胃癌组织中, 有2例胃癌组织的肿瘤细胞上有KDR 染色阳性反应信号, 定位于胞膜及胞浆中(F ig 2).
2. 3 胃癌的各临床病理因素与V EGF 表达阳性率的关系 如附表所示, 经统计学连续校正V2 检验,?、ì 期胃癌组织V EGF 的阳性率均高于é , ê 期胃癌组织(P < 0. 05) , é , ê 期和? , ì 期胃癌组织之间的V EGF 阳性率差异无显著意义(P > 0. 05). 不同组织类型胃癌组织的V EGF 阳性表达率无差异(P >0. 05). 淋巴结转移或(和) 肝转移的胃癌组织的V EGF 阳性率明显高于未发生转移胃癌组织(P <0. 05). 癌组织浸及或超过浆膜的V EGF 阳性率显著高于未浸及浆膜的胃癌组织(P < 0. 05).
