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专家解析新技术:如何实时观测RNA运动
www.yongyao.net  2011-1-7 21:30:34  来源:生物通  责任编辑:candyxie
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随着对细胞生理研究的逐渐深入,科学家们开始解析单个细胞的行为,这是因为即使是同样的遗传物质,同样的周边环境,这些细胞还是会朝着不同的方向发展,有时还会生成不同的功能,而且单个细胞的变化还关系到症,神经疾病等疾病。

然而要分析单个细胞,却不是那么容易的事情,在基因表达分析中占据主要位置的DNA芯片这种分析方法,由于灵敏度不够,所以不足以发现单个细胞水平上的差异,但是从单个细胞中挑选少量RNAs,或者蛋白也不容易做到,而且如果还要分析细胞的动力学因素,那就不只是繁琐实验的问题,还需要物理学,机械学,和生物学的多方配合。

来自爱因斯坦医学院的细胞生物学教授Robert Singer希望能了解mRNAs通过细胞核核孔中进入细胞质的具体过程,但是传统的显微技术并不能实时追踪到这个过程,因此Singer教授想出了一个新方法,观察活细胞中RNA的运动情况。

首先Singer教授用黄色荧光蛋白标记mRNA分子,用红色荧光蛋白标记核孔,通过高速摄像机将mRNA分子通过核孔的过程拍摄下来,从而揭示了mRNA分子如何通过核孔从细胞核进入细胞质的动态机制。这是研究人员第一次在活细胞中实时观察分子的膜孔转运。这项研究也发现了与之前认知不同的结果:mRNA迅速地通过了核孔,缓慢地停泊在细胞核的边缘等待释放进入细胞质,具体而言是单个mRNA分子在到达核孔后会等待80毫秒,然后在5毫秒的时间内快速通过核孔,最后分子在核孔的另一边又等待80毫秒然后才被释放到细胞质。

在此之前,显微镜的分辨率仅为200nm,这意味着活细胞中小于这一范围的分子无法被分辨。而通过这项新技术,研究人员将显微镜的分辨率提高了10倍,成功地区分了大小仅为20nm的分子。

这一方法的优点是测量精度提到了纳米级,缺点是这种成像方法中用到的两个相机拍摄必须完全对齐,这并不是个简单的工作。

Singer教授研究组在观察基因转录,分子运动方面获得了许多成果,比如他们曾首次亲眼目睹了活组织中的基因转录过程,这也是借助了高级荧光成像技术,他们量化测量了RNA聚合酶在活哺乳类动物细胞中实施遗传转录的动力学过程,从而将更高级生物中的基因转录机理分析提高到了一个新水平,并且这些研究人员还建立活体中基因转录的量化模型。

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