最近,科学家们就T1653的突变进行了较多研究。Shinkai等[ 11 ]研究结果表明无论HBeAg状态如何, HBV的T1653突变增加了HBV C2基因型患者发展成为HCC的风险。Orito 等[ 12 ]也发现日本C基因型患者的HBV 核心启动子区T1653突变与HCC发生有关。Yuen等[ 13 ]研究认为核心启动子及T1653突变与HBV 基因水平及肝硬化都是促HCC形成的独立危险因素,如果这几种独立因素联合作用, HCC发生的潜在风险将会增加。

Lin等[ 14 ]对HBV的前2S区进行了研究,发现前2S区的缺失突变在C型HBV感染者中频繁发生。他们认为无论何种基因型的HBV感染,发生了前2S缺失突变可能与HCC的发生有关。

4. HBV不同基因型与HCC发生的关系: 近期有很多关于HBV 基因型与HCC发生相关性的报道,亚洲HBV的基因型主要是B 型和C型。B型HBV又进一步分为Ba型和Bj型,前者在亚洲普遍存在,后者主要分布在日本。Orito等[ 12 ]调查了不同HBV基因型在病原学和临床上与HCC发生的关系,认为与Ba和C基因型相比,Bj型HBV相关的HCC的发生率较低,且Bj基因型的HBV患者发展为HCC的时间较晚。另有学者[ 15 ]对C型HBV患者的X基因测序结果进行统计学分析发现, X基因的第38位密码子突变是HCC发生的独立危险因素。

二、病毒基因产物的致癌机制

在HBV转录激活中起主要作用的是X蛋白。X蛋白被认为具有多效功能并参与慢性感染肝细胞的恶性转化[ 16 ] 。X蛋白可反式激活多种癌基因和抑癌基因,在转录水平上介导肿瘤的形成,且其还具有生长因子样作用,可直接刺激细胞生长并影响细胞分裂、分化和增殖,可与相关的DNA修复蛋白结合,导致受损细胞修复失败,从而发生癌变。X蛋白可阻断Fas /FasL凋亡信号途径,抑制细胞凋亡。

Pin1是一种独特的肽基脯氨酰顺反异构酶,它专一性催化已磷酸化的丝/苏2脯氨酰顺/反异构,这种构型转变是蛋白磷酸化后的调节机制,主要关系到细胞增殖和转化。Pin1在人类多种肿瘤中过表达,可加强和催化多种致癌信号表达,被称为肿瘤发生发展的催化分子。HBV的X蛋白具有丝氨酸2脯氨酸基序可以与肽基脯氨酸顺反异构酶结合,从而发挥该异构酶的致癌作用[ 17 ] 。这是新发现的HBV X蛋白促肝细胞癌发生的又一作用机制。

端粒是真核生物线形染色体末端的核苷酸重复序列,对维持染色体的稳定性具有重要作用。端粒酶是维持端粒长度必需的一种逆转录酶,是由RNA和蛋白质组成的酶,在细胞增殖、衰老、永生化和癌变等方面都发挥重要作用。肿瘤细胞的端粒酶发生明显变化,有较高水平的表达和很强的活性,已成为癌变细胞一个带有普遍意义的生物学标志。Zhou等[ 18 ]分别用S基因、C基因和X基因转染HepG2细胞,同步培养后检测3 种细胞系的端粒酶活性指数及凋亡率, 发现39. 5%的表达X基因的细胞进入S期,端粒酶活性较其它两种细胞高,而且抗2端粒酶的反义寡核苷酸诱导的凋亡率降低,这可能是肝细胞恶化的另一条途径。另有学者[ 19 ]研究发现, X蛋白可以激活人端粒酶逆转录酶( hTERT)使细胞发生永生化而癌变。hTERT是端粒酶核蛋白复合体的一部分,在不同HBV相关的HCC可作为基因整合的靶位点。Kojima等[ 20 ]在HCC细胞H7402中瞬时转染和稳定转染X基因,发现其hTERT的表达和端粒酶的活性均显著提高。因此他们认为X蛋白能够上调肝癌细胞中hTERT的表达和活性。HCC中HBV的X基因是常见的可与宿主染色体发生整合的开放性读码框架,发生整合的X基因常常发生突变。突变的基因产物仍然保留与p53结合的能力,使p53的基因修复及其介导的细胞凋亡功能减弱[ 21 ] 。

HBV的X蛋白参与HCC形成,已发生整合的X基因的编码产物常常缺乏134 aa～154 aa。有学者[ 22 ]通过创建一系列X蛋白部分缺失的四环素表达细胞系,检测其对促有丝分裂途径的激活,对内源性细胞周期素A的表达以及对细胞凋亡的影响来寻找X蛋白的功能区。条件性表达X蛋白51 aa～140 aa可以激活促有丝分裂途径诱导内源性细胞周期素A表达及致敏感细胞凋亡,这些作用与野生型X蛋白作用相同。而X蛋白51aa～115 aa则无上述作用,支持116 aa～140 aa在激活促有丝分裂途径诱导内源性细胞周期素A表达及致敏感细胞凋亡中发挥作用。X蛋白部分缺失的实验还显示了野生型X蛋白的两个氨基酸区域1 aa～78 aa及141 aa～154 aa对其自身功能的影响。通过与野生型X蛋白的免疫共沉淀实验表明X蛋白的N2端1aa～78 aa区域参与蛋白质2蛋白质相互作用导致X蛋白寡聚化。研究还发现X蛋白的1 aa～78 aa参与野生型X蛋白的间接促有丝分裂途径的激活、内源性基因的表达及凋亡。通过对野生型X蛋白及仅有1 aa～140 aa段的X蛋白的脉冲追踪研究证明C2端的141 aa～154 aa能够降低野生型X蛋白的稳定性,提示自发的缺乏134 aa～154 aa的X蛋白变异株的稳定性增强可能在致HCC的过程中发挥作用。