6 端粒酶( telomerase , TLMA)
TLMA 是一种核糖蛋白体酶, 能利用自身RNA为模板合成端粒DNA, 弥补随着细胞有丝分裂逐渐缩短的端粒长度。各级膀胱癌上皮细胞瘤患者尿中均有端粒酶活性表现。马鹏程等[6]采用TRAP- PCRELISA法检测32 例膀胱癌患者尿液和膀胱冲洗液中脱落细胞、膀胱癌组织、20 例正常膀胱组织及14例非膀胱肿瘤患者尿液脱落细胞中端粒酶活性, 并行尿脱落细胞学检查。32 例膀胱癌患者尿液脱落细胞、膀胱冲洗液脱落细胞、膀胱癌组织中端粒酶活性阳性率分别为65.6%、71.9%和84.0%, 20 例正常膀胱组织端粒酶活性均为阴性, 14 例非膀胱肿瘤患者尿液中1 例端粒酶活性阳性。端粒酶活性阳性表达与肿瘤的分级、分期之间差异无明显相关性( P>0.05) , 敏感性明显高于脱落细胞病理学检查。结果表明尿液、膀胱冲洗液脱落细胞端粒酶活性测定敏感性较高, 可用于膀胱癌的早期诊断。
7 CD44V6
CD44 分子是细胞- 细胞、细胞- 间质之间的粘附因子, CD44 编码基因的选择性拼接产生许多异构体, 其中异构体CD44V6 是近年来发现的一种提示肿瘤浸润和转移的指标, 可用于临床诊断、监测转移等。Kuncov 等[7]通过对HT1197 和5637 两株尿路上皮细胞癌细胞株的研究表明CD44V6 在膀胱癌的表达与两株细胞高度增殖活性、干细胞样表型、细胞异型度有关。在膀胱癌, CD44V6 可能是一种潜在的转移抑制因子, 膀胱癌CD44V6 表达缺失与预后差可能有关。
8 L- selectin
L- selectin 是细胞粘附因子选择素家族成员, 是一种跨膜糖蛋白, 通过钙依赖性方式与细胞表面糖蛋白相互作用, 介导同种亲和性细胞- 细胞间的粘附并参与建立和维持细胞间的连接作用。作为细胞粘附因子之一的选择素家族在癌细胞向血管内移动与血管内皮细胞粘附过程中发挥重要作用。
L- selectin通过肿瘤细胞和血管内皮细胞及细胞外基质等粘附这一过程在膀胱肿瘤的生长和转移浸润中起重要作用。
9 微小染色体维持蛋白5 (minute chromosomemaintenance protein5, MCM5)
微小染色体维持蛋白MCM 是DNA 复制启始和延伸的重要因子, 只在增殖细胞中表达, 而在静止细胞中无表达。MCM5 是MCM蛋白(MCM2～7) 中6个亚单位之一, 在DNA 复制的起始、延伸过程中起重要作用, 是真核生物DNA 复制必不可少的物质,检测MCM5 可直接反应MCM蛋白的水平。MCM5仅存在于进入细胞周期的细胞, 终末分化细胞和静止期细胞很少表达, 被认为是特异性增殖相关因子。在正常组织中MCM5 仅局限于上皮基底层的增殖区, 而在不典型增生和肿瘤组织中, MCM5 可扩展到上皮全层。Stoeber 等[8]采用荧光标记单克隆MCM5抗体检测353 例有血尿或下尿路症状、以及膀胱癌术后随访患者尿沉渣标本, 结果显示, MCM5 诊断膀胱癌及膀胱癌术后复发的敏感性和特异性均为87%, 而常规尿细胞学检查敏感度仅为48%, 二者差异有统计学意义( P<0.01) 。提示尿脱落细胞MCM5检测是一种有价值的膀胱癌诊断方法。
10 p27
p27 又名KipL, 其在体外与CyclinE、细胞周期依赖激酶2(Cdk2) 、CyclinD、Cdk4 紧密结合, 是细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CDKI) 中的一员, 普遍认为是一种新的肿瘤抑制基因。p27 能抑制已与CyclinE结合并已激活的CDK2, 即抑制CyclinE /CDK2的激酶活性, 抑制CDK2 前体的激活, 在一定程度上调节CyclinE 的表达水平, 作为细胞外刺激信号的潜在媒介调控细胞周期, 参与细胞增殖、分化和凋亡的调控。Franke 等[9]报道p27kipl 蛋白的表达减弱或消失与尿路上皮肿瘤的发生有关。
11 微卫星不稳定性(microsatellite ins tability,MSI)
肿瘤细胞中微卫星的异常改变主要表现为不稳定性(microsatellite instability, MSI) 和杂合性缺失( loss of heterozygosity, LOH) 。在膀胱癌中, DNA 修复机制的改变可导致DNA 复制错误, 通过分析小片段重复DNA 序列或微卫星DNA 的方法可有助于膀胱癌的诊断。Baron 对25 例膀胱癌术后患者进行微卫星位点(ACTBP2、D16S476、FGA、D4S243、D9S242、D9S252、D11S488、D16S310、THO、D9S752、D17S695、LPL、D9S144、D20S454、D17S786、D17S960、D18S51、D9S162、IFN、D9S171) 的分析, 在18 例经膀胱镜活检证实复发的患者中有14 例微卫星出现异常, 敏感性为78%; 在7 例膀胱镜活检为阴性的患者中有1例微卫星出现异常改变, 此例患者于6 个月后被病理证实出现复发[10] 。狄金明等[11]将42 例患者尿液标本经适当处理后, 采用PCR- PAGE- 银染方法检测尿脱落细胞中微卫星不稳定性的情况, 结果显示膀胱癌患者尿中MSI 阳性率为59.52%, 浸润性肿瘤患者尿中阳性率较高, 但无统计学意义( P>0.05) ; 复发病例中阳性率( 80.00%) 比初发者( 40.91%) 明显要高( P<0.05) , 认为检测尿脱落细胞微卫星不稳定性可以作为膀胱癌的一种无创诊断及筛查手段。微卫星分析具有高敏感性, 但是此方法存在一定的局限性。不同微卫星位点的选择会导致结果的差异, 所以微卫星分析技术广泛开展有待大规模的研究筛选有意义的位点。
