3.4 小儿急性鼻窦炎
病因与病毒、细菌感染、及遗传因素等有密切关系。可迁延到咽、喉、中耳、眼等毗邻组织,影响患者呼吸、饮食、睡眠等生理功能。迁延不愈形成慢性鼻窦炎后,会造成患儿抵抗力下降,影响患儿的智力和面容的发育。因此,如何促进小儿急性鼻窦炎的痊愈,是医生、患者及家属共同关注的问题。柴向华等[6]收集耳鼻喉科就诊的小儿急性鼻窦炎患者200例,发病时间3～12 w,其中男性106例,女性94例,年龄4～8 岁。将研究对象随机分成研究组和对照组,每组100人,两组病人均常规给患儿使用头孢克肟片100 mg、3 次/ d口服,桃金娘油胶囊120 mg/次、3 次/ d口服研究组加用湖北威尔曼制药有限公司生产的溶菌酶肠溶片(20片/合,50 mg/片)每次按1.67 mg/kg、3次/d口服,对照组病例不用。其结果显示:小儿急性鼻窦炎在溶菌酶(Lysozyme)的辅助下,症状在14 d左右迅速消失,鼻黏膜恢复正常,而对照组的小儿急性鼻窦炎愈合时间明显长于研究组(20 d),显示溶菌酶(Lysozyme)有高效的辅助抗菌功能;研究组与对照组在治愈率与显效率方面均具有显著性差异,证明溶菌酶(Lysozyme)具有显著加快小儿急性鼻窦炎痊愈速度,且尚未发现不良反应,有一定的临床推广应用价值。
由于溶菌酶对五官科疾病的预防和治疗有很好的疗效,目前国内有溶菌酶含片上市,溶菌酶在治疗五官科疾病具有广阔的应用前景。
4 溶菌酶在烧伤创面感染中的应用
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcusaureus,MRSA) [7]是烧伤创面感染的主要菌株之一,近年来感染发生率不断上升,由于多种抗生素和创面外用药物的使用及菌株的变异出现了MRSA及中间型抗万古霉素金黄色葡萄球菌等耐药菌株, 其感染程度难以控制,导致创面不愈合。李罗珠等[7]用复合溶菌酶治疗190例烧伤患者,烧伤创面分泌物细菌培养结果为:MRSA及中间型抗万古霉素金黄色葡萄球菌的创面200 个。使用复合溶菌酶48,96 h后,对MRSA的有效率98%,100%。对中间型抗万古霉素金黄色葡萄球菌的有效率为33%,10%。复合溶菌酶对MRSA及中间型抗万古霉素金黄色葡萄球有显著的杀菌效果,是治疗烧伤创面感染的用药选择之一。
5 溶菌酶在抗SARS
病毒中的应用SARS 冠状病毒属于单股正链RNA病毒,其RNA基因组（RNA genome）呈单链、疏松螺旋状,有序地分布在颗粒之中,病毒颗粒直径为100 nm左右,基因组约29700 bp。由于溶菌酶是碱性蛋白质,可以和RNA形成复合盐,从理论说应该对冠状病毒有作用,所以陈冬梅等[8]用溶菌酶联合激素抗生素及抗病毒药物对3例确诊为轻症患者和5例疑是非典型肺炎病人进行研究,在治疗结束后进行观察。结果表明:轻症SRAS感染患者中,1 例WBC水平较治疗前稍升高,Sao2由治疗前的<93%提高至>95%;肺部斑片浸润性阴影缩小约15%,2 例患者无明显改变,5例疑为SARS患者中有2例发热,肌肉酸痛症状者分别在第7,9 d 缓解;3例头痛和其相应症状在第8 d减轻,治疗期间无1例患者发生过敏或皮疹等药物副反应。这就提示溶菌酶可能是一种安全的辅助抗SRAS治疗药物。
6 溶菌酶在治疗疱疹的应用
Camillo Bianchi等[9]报道溶菌酶用于治疗疱疹有良好的疗效。患生殖器疱疹的病人, 口服溶菌酶可显著地减少复发的次数和程度, 并改善症状。国外有报道在一项有313位疱疹病人参加的研究中,患者患有带状疱疹,单纯性疱疹,卡波西水痘样疹,水痘,口腔炎,多形性渗出性红斑。这些病人口服溶菌酶1 g/d（连续服用1 w）,疗效显著。该项研究也表明溶菌酶有很好的耐受性及消炎作用,同时对这个研究还指明溶菌酶对局部应用病毒性感染引起的皮肤病变有治疗作用:如寻常疣,及传染性软疣,疗效一样好,对患有带状疱疹和单纯性疱疹的年老病人也证实了口服溶菌酶的活性, 还证明了这种药可增加IgG的量以增强免疫作用,它还可使血清中补体的活性正常化。
7 溶菌酶在治疗肿瘤方面的应用
Yamaokaky等[10]对11例宫颈癌患者每天注射氯化溶菌酶(剂量为270mg/ 次),连续注射3 个月,同时对患者施行放疗。对照组11 例宫颈癌患者施行放疗,不注射氯化溶菌酶。结果发现11例给予氯化溶菌酶治疗的患者在结束放疗后免疫参数较对照组有明显的改变:其外周白细胞总数和淋巴细胞数等并没有相应的减少,而对照组外周淋巴细胞数却相应地减少。结果表明:氯化溶菌酶有明显增强宫颈癌患者放疗后引起白细胞减少的抑制效应,氯化溶菌酶具有提升癌症患者营养机能和明显改善肝功能的作用。氯化溶菌酶作为免疫调节剂的一种,能增强晚期宫颈癌患者的免疫能力,氯化溶菌酶作为一种辅助剂,对癌症患者的治疗疗效有促进效用。
8 溶菌酶的研究进展
8.1 周翔等[11]采用RT-PCR的方法,从SD 大鼠白细胞中成功扩增了溶菌酶基因,构建大鼠溶菌酶重组克隆质粒PMD18-T/RLYZ[10]和大鼠溶菌酶N端多肽的重组表达质粒PLY77[10] 。通过重组大鼠溶菌酶N 端基因片段在大肠杆菌ROSETTA[10]中实现高效表达.亲和层析大量制备目的多肽LY77[10] ,而且目的多肽LY77与晚期糖基化终产物具有很高的结合活性,其研究表明:原核细胞可以高效表达溶菌酶的N端多肽,而不影响原核表达系统,这不失为一种制备溶菌酶功能性多肽的有效手段,还证实该重组多肽LY77对晚期糖基化终产物具有很高的亲和力,对于进一步研究可能应用于防治糖尿病慢性并发症方面具有新的开发前景。
8.2 由于人溶菌酶具有独特的优越性和多种多样的药理作用效果,在临床上具有多种重要的应用价值,但天然人溶菌酶来源极其困难,利用DNA重组技术进行生产是解决这一难题的有效途径。
ZH CHEN 等[12]从人类胎盘中提取RNA,利用DNA重组技术,在原核生物中高效表达,通过纯化得到人溶菌酶,同时培养人胃癌细胞和肺成纤维细胞。给予不同浓度(5,10,100 μg/L)的重组人溶菌酶（recombinant humanlysozymes,rHLYS）刺激细胞的生长。用MTT法检测其对两种细胞的抑止率。
其结果显示:浓度为5 和10 μ g/L 的rHLYS能够促进两种细胞的增殖,而浓度为100 μg/L的rHLYS能够明显抑制人胃癌细胞的增殖,而此浓度的rHLYS对肺成纤维细胞没有抑止作用。
由于溶菌酶在胃壁细胞和胃相关肿瘤中表达,人溶菌酶是一种重要的非特异体液免疫因子,参与机体的多种免疫反应,在机体正常防御和非特异免疫中具有重要作用。利用基因工程重组人溶菌酶而在体外抑止人胃癌细胞的增殖,将为进一步探索rHLYS作为一种新型抗癌剂奠定了良好的基础。
8.3 C-type lozyme(clz)是一种对人体胃肠道黏膜分泌具有重要保护作用的抗菌酶。最近, Dasuke Jnazaki等[13]发现一种具有抗微生物的小分子量螺旋环溶菌酶(clz)片段,其可通过共存的蛋白酶进行生理性水解而得到,从而发挥其在在体内对胃黏膜的保护作用.由于胃蛋白酶是体内重要的蛋白水解酶,它能切割肽链中的亮氨酸和苯丙氨酸的羧基连接,因此在研究中,在体外模拟新生儿胃肠环境,在无菌水中加入（m g / m l ）溶菌酶和胃蛋白酶A（pepsin-A）,将溶液pH值调至4,然后加入胃蛋白酶A（胃蛋白酶A与溶菌酶的比例为1∶50）,置于37℃环境温育24h,最终将溶液pH值调至7,此溶液体系称为pepsin-processed cLZ (Ppn-Lz)。将(Ppn-Lz) 低压冻干成粉末。通过SDS-PAGE对(Ppn-Lz)进行鉴定,运用逆相HPLC 分离(Ppn-Lz)得到40% 的水解CLz 片断,分子量分别为7.3、5.4、4.3kDa。 通过实时动力荧光计检测水解CLz片断对底物微球菌属膜的渗透性。其研究证实了溶菌酶在体内能被分解成各种具有生物活性的抗菌片段,共存的胃蛋白酶是一个关键的触发因素,而且其被水解的抗菌片段能以剂量依赖的形式对各种细菌发生破膜作用.其研究进一步阐明了CLz保护胃黏膜的分子机制,为设计抗生素药物用于治疗各种传染性疾病提供新的策略[14-17] 。
