郭兆诚

【摘要】　目前艾滋病的流行情况令人担忧,严重影响了社会经济发展,因此艾滋病的防治显得十分重要。为遏制艾滋病的传播和有效治疗艾滋病,除寻求更加有效的疫苗和治疗药物外, H IV感染的早期诊断非常重要,早期诊断有利于控制传染源及传播途径。早期诊断主要靠实验诊断,有免疫学抗体抗原检测、分子生物学核酸检测、分离培养、CD4 T细胞计数等。

【Abstract】　Now the popular circumstance of theA IDSmake peop leworry. It seriously affected the socialeconomic development. The p revention and cure that the A IDS seem to be very important. In order to supp ressthe dissemination ofA IDS and validly treatA IDS, in addition to look for themore valid vaccine andmedicine forcuring, H IV infection of earlier period examine a patient count for much, examined a patient to be important tocontrol infection source and sp read the path in early days. Examining a patient to mainly depend on experimentalexamination in early days. There are the immunological antibody antigen examination, the molecular biologicalnucleic acid examination and separate development, the cells of CD4 T counted etc.

联合国艾滋病规划署和世界卫生组织联合发布报告指出, 2006年全球艾滋病病毒携带者人数为3 950万; 2006年新增艾滋病感染者430 万,其中40%为15 ～24 岁的年轻人;2006年全球有290万人死于艾滋病。

卫生部通报我国艾滋病的流行现状:截止至2006年10月31日,全国历年累计报告艾滋病感染者183 733例,其中艾滋病患者40 667例;死亡12 464例。感染者和患者人数增加,艾滋病疫情进一步蔓延的形势仍然严峻。艾滋病的流行造成对健康的巨大危害和社会经济的破坏。国家非常重视艾滋病的防治工作, 出台了一系列艾滋病防治管理的法规和措施,务求实效。寻求更加灵敏、特异、准确的检测方法是一项重要的工作。自1985年第一个艾滋病诊断试剂盒问世以来,艾滋病实验诊断技术有了很大的进步,下面就艾滋病实验诊断的进展作以下综述。

1　艾滋病病原简介

艾滋病的病原微生物是艾滋病病毒(H IV) ,为带有包膜的RNA逆转录病毒,在分类上属于逆转录病毒科慢病毒属。H IV呈球形或卵形,直径100～130 nm,由包膜和核心两个部分组成。包膜蛋白包括外膜糖蛋白( gp120)和跨膜糖蛋白( gp41) ,核心部分由核壳蛋白、两个相同拷贝的核酸基因组2RNA和酶类组成。CD4 是H IV最重要的靶细胞,在CD4 淋巴细胞内反转录酶将RNA逆转录成前病毒DNA, 接着整合到宿主细胞基因组DNA中,而后和细胞一起复制。

2　免疫学抗体抗原检测

2.1　抗体检测　H IV 抗体一般在感染4周后逐渐出现,可延至终身,是人类重要的检测指标,相比于近年来逐步发展起来的用免疫技术测定其感染因子,检测H IV特异性抗体仍是诊断艾滋病的重要依据[ 5 ]。

2.1.1　H IV抗体检测初筛实验

2.1.1.1　酶联免疫吸附实验( EL ISA)法敏感性好且操作简便。目前酶免法测H IV抗体试剂已发展到第四代,市售试剂有荷兰生物梅里埃H IV21 /2抗体检测试剂、美国的雅培、上海科华、北京万泰等,其敏感度几乎100% ,特异性在98110 ～99180% ,并且适用于批量操作,缺点是有一定假阳性。

2.1.1.2　免疫荧光法( IFA)是借助抗体反应进行荧光染色的诊断技术,由于非特异荧光较难去除等缺点,因而仅用于H IV抗体初筛,阳性结果需经确证实验证实,该法操作简便、敏感性高、特异性比EL ISA法高。

2.1.1.3　凝集实验具有不需任何设备,一步即可迅速得到结果的优点,敏感性和特异性与EL ISA 相近。缺点是有假阳性,且价格昂贵,亦仅作初筛实验。

2.1.1.4　在EL ISA基础上发展起来的金免疫渗滤实验(GI2FA) , GIFA始于1985年,最初以酶作为标记物, 1989年发展以胶体金为标记物用于检测艾滋病毒抗体的渗滤实验[ 9 ]。1990年Oskiowicz等应用硒作为标记物建立了免疫层析实验。

上述2种方法具有快速、简单,不需要任何仪器设备,几分钟可用肉眼观察结果的优点,目前在临床检测中已广泛应用。

2.1.2　确证实验

2.1.2.1　免疫印迹实验(WB)WB是目前最特异、敏感的证实H IV感染的方法,也是国内H IV确认的首选方法。WB实验能检测到gp120, fp160, p66, p51, gp41, p31, p24 和17 kDa等抗原相应的抗体。我国对于WB 实验结果判断标准: H IV阳性:至少有2条env带和至少1条env带和p24带同时出现。H IV阴性:无任何H IV抗体特异带出现。H IV可疑:出现H IV抗体特异带,但带型不足以确认阳性者。WB 实验操作较EL ISA稍复杂,检测需在确证实验室进行。由于自身抗体的存在,该方法仍有假阳性。

2.1.2.2　条带免疫印实验(LTA)其原理和操作方法与WB实验基本相同,只有条膜来源和组成有所区别。检测时信噪比高,本地清晰,无潜在假阳性干扰,克服了WB实验中使用病毒裂解产物而可能产生的同相载体上某些重要抗原不足缺点。这类试剂特异性高,但也有可能由于病毒株所合成抗原决定簇部位发生突变致H IV抗体假阴性。唯一缺点是由于合成抗原不能糖基化,其立体构象与天然抗原有一定差异,在一定程度上可能影响了模拟真实H IV抗原检测抗体的能力。

2.1.2.3　放射免疫沉淀实验本法是将感染的H9细胞和35S蛋氨酸孵育,用去垢剂将细胞溶解,再用抗LgGA蛋白琼脂糖去除有反应性的人抗原,将上清液(含有病毒蛋白)与待测血清混合,如有H IV抗体,则同位素标记的H IV蛋白与之结合产生沉淀。沉淀物用含有Cleland试剂的缓冲液和十二烷基硫酸( SDS)洗脱,即可将病毒抗原分离。然后病毒蛋白用放射自显影鉴定,并同时用已知的分子标记物比较。该方法敏感性和特异性比WB方法还高,但费时多,技术难度大。

2.2　抗原检测　H IV p24抗原的检测,用于抗逆转录病毒治疗医药疗效及H IV感染者发展为艾滋病的动态观察。应用免疫荧光法、EL ISA法及放射免疫直接测H IV抗原,通常测p24抗原,由p24抗原出现于抗体出现之前,对窗口期感染的早期诊断有帮助意义。为不断提高p24 抗原的检出率, p24抗原检测技术近年有较大进展[ 14 ]。新的检测技术方法有:

2.2.1　免疫复合物裂解检测法( ICD) , P242ICD的敏感性为90%[ 7 ] ,鉴于其敏感性较低,不宜单独使用。但在不具备先进仪器的地方有较大应用价值,为节省经费可在急性感染检测时替代H IV RNA检测。

2.2.2　超敏感酶免疫测定法(UEI)又称双位点免疫复合物转移酶免疫测定,基本技术路线是利用高亲和力抗体浓缩富集血清中的p24 抗原,然后进检测。该法可将下限延伸至012 pg/ml,缺点是对试剂要求高,需要一定仪器,操作复杂。

2.2.3　免疫吸附电子显微镜法( ISEM) ,将抗原特异性与电子显微镜的高分辨力相结合,实现了对病毒颗粒的直接特异性检测,灵敏度高。但需要昂贵精密仪器,操作复杂。

2.2.4　线性免疫酶测定(L IA)和Cobas Core H IV Combi EIA是新近发展起来的第四代H IV检测技术[ 3 ]。目前最敏感的抗原试剂盒的检测阈值为0101 pg/ml。

2.3　H IV抗体检测的窗口期　从受艾滋病病毒感染到血液中可以测出艾滋病病毒的抗体,这段时间称为窗口期。由于人体免疫应答的差异,窗口期短的2～3周,长的2～3个月,一般45 d左右。处于窗口期的艾滋病病毒感染者血液中虽然检测不到抗体,但血液、精液、阴道分泌物等体液中含有艾滋病病毒而有传染性。