结　　　果

转染Smad 7 cDNA 的MsC 鉴定　经两端测序结果显示, 与基因库中小鼠Smad 7 序列完全一致,又经EcoR Ⅰ和X ho Ⅰ双酶切及EcoR Ⅰ单酶切鉴定,证明Smad 7 基因已被正确地重组至pcDNA3. 0载体中。转染的MsC 经G418 筛选后,共获得26个克隆,经Nort hern blot 及Western blot 检测,其中S-22 与S-26 两克隆稳定高表达Smad 7 。Northern blot 结果显示, S222 克隆Smad 7 mRNA 的表达比空载体组高约2 . 9 倍,而S-6 克隆的表达水平大致与S222 克隆接近(图1A、C) 。Western blot 结果显示,S-22 克隆Smad 7 蛋白表达比空载体组高约2. 5 倍,而S226 克隆的表达水平大致与S222 克隆接近,其相对分子质量约为46 000 蛋白条带(图1B) 。

图1 　大鼠转染细胞Smad 7 的表达

1 : MsC; 2 : MsC t ransfected by pcDNA3. 0 ; 3 : S - 22 ; 4 : S - 26
A :Nort hern blot analysis for detecting Smad 7 mRNA ;
B :Western blot analysis for detecting Smad 7 protein ;
C:Statistical analysis of relative Smad 7 mRNA amount

阳性MsC 克隆Col ⅠmRNA 与蛋白表达的改变　RT2PCR 结果显示, S-22 与S-26 细胞克隆ColⅠmRNA 表达均降低, 其中S-22 克隆比空载体组降低约47 %(图2A、C) 。Western blot 结果显示,上述两细胞克隆Col Ⅰ蛋白表达均降低,其中S-22克隆比空载体组降低约65 % ( P < 0 . 05) ,相对分子质量约为80 000 (图2B、D) 。

阳性MsC 克隆Col ⅢmRNA 与蛋白表达的改变　RT2PCR 结果显示, S-22 与S-26 细胞克隆ColⅢmRNA 表达均降低, 其中S-22 克隆比空载体组降低约56 % (图3A 、C) 。Western blot 结果显示,S-22 与S-26 细胞克隆Col Ⅲ蛋白表达均降低, 其中S-22 克隆比空载体组降低约54 %( P < 0 . 05) ,相对分子质量约为66 000 (图3B、D) 。