翁 良,赵 昕
(卫生部北京医院检验科,北京100730)
C 反应蛋白(C2reactive protein ,CRP) 在1930 年由Tillet 和Francis 发现。他们观察到一些肺炎病人的血清能和肺炎链球菌的荚膜C2多糖起沉淀反应。后来证实血清中造成沉淀反应的物质是一种蛋白质,称之为C 反应蛋白。
CRP 属于系统发育上十分古老,结构高度保守的穿透素(pentraxin) 蛋白家族成员,是人类主要的急性期蛋白,感染和组织损伤时血浆浓度急剧升高,有时可达1000 倍以上,它在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。CRP 主要由肝脏合成,肾脏是继肝脏之后第二个被发现能分泌CRP 的器官。CRP 分子量为115 KD ,由5 个相同的亚基以非共价键对称地围成一中心孔状五聚体结构,每个亚基由206 个氨基酸组成,分子量为23 kD ,含有两个Ca2 + 结合位点。生理条件下,CRP 在体内低速率合成,以较高的亲和力与内质网相连。急性期,在IL26 等细胞因子诱导下,CRP 基因表达急速上调,内质网结合处CRP 的构象发生变化,与内质网的亲和力下降,迅速释放,血浆中CRP 的浓度急剧升高。
1997 年Ridker 等所进行的前瞻性研究显示健康个体中CRP 浓度的监测可以预测未来心血管疾病的发生[1 ] ,这是一项具有重要意义的成果。他们统计得出CRP 基础水平处于最高四分位数的男性发生心肌梗塞与缺血性卒中的危险分别是正常人的3 倍与2 倍。现在临床上CRP 已经被当作一种独立的心血管疾病预测指标。CRP 作为一种危险因素的预测指标具有长时、稳定、不依赖于其它危险因素的特点。
无感染的健康成人血清CRP 正常值一般在3 mg/ L 以下,当CRP 水平大于3 mg/ L 时,提示存在某些潜在的病理过程。在利用CRP 预测心血管疾病时,是通过检测高敏C 反应蛋白(hsCRP) 水平来实现的。所谓hsCRP 检验是指检验低水平CRP 浓度,即011 - 10 mg/ L ,该水平可以很好的预测未来心血管事件的发生;而常规CRP 检验是检验10 mg/ L 以上浓度的CRP 水平。作为心血管疾病的预测指标,hsCRP 相对其他一些预测指标如总胆固醇(TC) 、高密度脂蛋白胆固醇(HDL2C) 、低密度脂蛋白胆固醇(LDL2C) 、同型半胱胺酸、载脂蛋白A(Apo A) 、载脂蛋白B (Apo B) 等的预测价值要高的多[223 ] 。在临床上如果采取联合检测hsCRP 和TC/ HDL2C 比值的模式可以大大增加预测未来发生心血管疾病的准确度[223 ] 。
CRP 基础水平与很多因素相关,如性别、年龄、体重指数、血脂、血压、环境因素、生活方式、遗传因素等,在各种因素所导致个体基础CRP 水平差异方面遗传因素所起的作用能够达到40 %[4 ] 。所以研究遗传因素对于CRP 水平的影响就显得尤为重要。目前这方面的研究主要集中于CRP 基因多态性对于CRP 水平的影响。本文就基因多态性与已发现的与CRP 水平及冠心病相关的CRP 基因多态性做一综述。
1 多态性的概念及意义
一个基因座上可以存在多条等位基因,当某个等位基因在种群中稳定存在并且概率大于1 %时,这个等位基因所在的位置被认为是多态性(polymorphism) 的,这种现象称为遗传多态性[5 ] 。而当某个等位基因在在种群中的概率小于1 %时,则称之为变异。多态性现象是普遍存在的,在众多的多态性中,最主要的一种是单核苷酸多态性,约占90 %。当种群中基因组DNA 某个等位基因座位上仅发生单个核苷酸的改变,即A、G、C、T间的相互转换,且概率大于1 %时,称为单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism ,SNP ,读为“S”“N”“P”或“SNiP”) 。它是继限制性酶切片断长度多态性( restric2tion fragment length polymorphism ,RFLP ) 以及短串联重复序列(short tandem repeat) 之后的新一代多态性遗传标记。理论上,首先发现与血浆中的CRP 水平相关的多态性是Szalai 等在2002 年报道的内含子中的GT 重复序列[8 ] 。他们以系统性红斑狼疮病人为病例组,以正常健康人为对照组,检测他们的血浆CRP水平和CT重复序列的重复次数。他们发现重复次数从9 次到25 次存在13 种,其中以16 次和21 次最多,大约占75 % ,并且对应于较低的CRP 水平。
之后Brull 等[9 ]在2003 年测量了健康男性在大强度训练前和训练48 小时后以及接受冠状动脉搭桥术(coronary arterybypass graft ,CABG) 的病人手术前后的CRP 水平,并筛选了他们的CRP 基因。他们发现了两种新的单核苷酸多态性,一种是位于启动子区的rs2794521( - 717T/ C) ,一种是位于3’非翻译区的rs1130864 ( + 1444C/ T) 。其中rs2794521 与CRP 水平无关,而rs1130864 与CRP 水平相关,尤其是TT 纯合子者有着较高的CRP 基础水平。
