丙型肝炎治疗的研究进展

www.yongyao.net　　2009-8-31 13:43:06　　来源：　　责任编辑：

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摘要:丙型肝炎严重威胁着人类的健康,目前寻找一种有效的疗法至关重要。撰文对丙型肝炎的药物治疗、RNA干扰、病毒抗原编码基因的转基因表达、反义核酸技术及表位疫苗等项治疗方案予以综述,提出了包含有多个保守丙型肝炎病毒(HCV)抗原表位的多价融合抗原基因的DNA疫苗将成为今后丙型肝炎治疗的研究方向。该疫苗可以在不同个体中激起广泛而强烈的对不同HCV基因型有交叉反应性的T细胞免疫应答,并有望用于丙型肝炎人群的治疗。

丙型肝炎病毒( hepatitis C, HCV)为单股正链RNA病毒,直径40～60 nm,有包膜。1989年, HCV即已成功克隆,且其病原学、流行病学、慢性化机制等方面均取得较大进展,但因HCV高度变异性,使治疗和预防仍有很大困难。目前全世界约有1. 7亿感染者,占全球总人口的3%;不同国家HCV感染率不同,在0. 1%～10%之间^{[ 1 ]}。资料显示,我国约有4 000万HCV感染者,占我国人口的3. 2% ,且有增加的趋势^{[ 2 ]}。HCV极易导致病毒持续感染和肝炎慢性化,统计学显示^{[ 3 ]} , 50%～80%的HCV感染者可发展成慢性肝炎,其中约20%慢性肝炎患者在20年内可发展为肝硬化,一旦到肝硬化阶段,每年将有1%～4%可进展为原发性肝癌,在美国25%的肝癌患者源于HCV感染。HCV感染加重了社会负担,据统计,美国仅1998年用于HCV治疗的费用就为18亿美元。HCV严重威胁着人类的健康,缩短了人的寿命,有数据显示死于HCV的大多数患者年龄为44～54岁,因此, HCV的治疗至关重要。到目前为止,科学家们已经对治疗HCV 做了很多有益的尝试。

1　丙型肝炎的药物治疗

聚乙二醇化γ-干扰素2a或2b与三氮唑核苷联合应用是目前公认的治疗丙肝的标准方案。干扰素会激活一种名为PKR的酶, PKR可攻击某些细胞蛋白,导致蛋白合成终止,没有蛋白合成,病毒将不能成功地感染。聚乙二醇化可使干扰素分子加大,吸收和代谢均减缓,延长其在体内的生物活性时间;三氮唑核苷类药物可以减轻治疗的副反应如溶血等。尽管该联合疗法大大提高了丙型肝炎的治愈率,但仍有相当一部分患者不能取得满意的疗效。其中HCV基因I型感染者疗效较差;同时很多患者不能耐受该联合疗法的副作用,如疲劳、流感样症状、血液学异常(主要来自三氮唑核苷)和神经精神症状等; 而且有很高的复发率^{[ 4 ]} 。因此,目前急需开发一些更加方便、有效和副作用较少的新药,以补充现有的治疗方案。现正开发中的新药物主要有如下几种^{[ 5, 6 ]} : HCV 蛋白酶抑制剂, 包括NS2-3 蛋白酶和NS3 /4A丝氨酸蛋白酶抑制剂; HCV解旋酶抑制剂; HCV NS5B RNA聚合酶抑制剂; p7 离子通道抑制剂,如金刚烷胺; HCV IRES ( internal ribosomal entry site)抑制剂,以阻断HCV蛋白的翻译;免疫调节剂,以提高机体的免疫反应如白细胞介素12,或减轻炎症性肝损伤如白细胞介素10;但这些新药物有效性、安全性及是否造成HCV的耐药性变异等方面尚须进一步研究,因而近期内很难应用于HCV 感染者的治疗。

2　丙型肝炎的基因疗法

与传统基因治疗不同,基因疗法是指目的基因和宿主细胞的基因不发生整合,暂时表达的目的基因产物,像平常在临床上使用的药物一样,具有一定的治疗作用。

2. 1 　RNA 干扰( RNAi) 　小干扰RNA ( small interferingRNA, siRNA)是分子结构简单、分子质量小、具有催化活性的RNA分子,它能特异性结合并切割病毒RNA,而又不影响宿主细胞RNA,因而在治疗病毒性传染病中有潜在的应用价值。HCV是一种RNA病毒,用目前的抗病毒手段非常容易诱导变异,从而产生耐药性。Volarevic等^{[ 7 ]}对siRNA在细胞内对HCV的切割活性进行了系统论述。Suzuki等^{[ 8 ]}的实验则进一步显示,在组织培养中siRNA对HCV有非常明显的抑制作用。因此, RNAi技术为HCV感染的治疗提供了一个新途径。

2. 1. 1 　HCV 　NS5B 为靶点的RNAi HCV NS5B 蛋白具有RdRp活性,实验证实该蛋白为抗HCV感染研究的理想靶点,McCaffrey等^{[ 9 ]}以HCV的NS5B区与荧光蛋白构成能在体内表达的小发夹状RNA ( shRNA)的表达载体,通过监测荧光蛋白的量来判定针对NS5B的siRNA的抑制效应。结果发现,经转染此种载体后,小鼠体内的荧光蛋白表达下降了98% ±0. 6%。雷迎峰等^{[ 10 ]} 以HCV NS5B 为靶基因, 依据Tuschl等^{[ 11 ]}关于siRNAs设计原则,设计并合成了针对NS5B基因的siRNAs,研究其阻断NS5B基因表达的效应,结果表明siRNAs阻抑效果有70%～80% ,逆转录2聚合酶链反应实验结果也表明, siRNAs抑制效果明显,然阻抑效应是短暂的,在实验中观察到其抑制效应仅持续约5d。