3 综合评价

3.1 白细胞介素10治疗关节炎的作用途径  正常生理情况下，人体内能分泌白细胞介素10的细胞主要有TH2细胞、单核细胞、巨噬细胞和活化的B细胞。此外，TH1细胞、TH0细胞、CD8+ T淋巴细胞、肥大细胞、角质细胞、小胶质细胞和星型胶质细胞、肾小球系膜细胞及胎盘的滋养层细胞等亦可分泌白细胞介素10。因此，白细胞介素10是体内一种多细胞来源的细胞因子。正常情况下，人体内白细胞介素10的水平很低，只有当人体受到某些外界因素作用（如紫外线照射和各种应激状态时）或患有某些疾病（如某些微生物的感染和自身免疫性疾病等）时，上述细胞分泌白细胞介素10明显增加，以适应机体的需求，保持机体内环境的相对稳定。

白细胞介素10对关节炎发挥治疗作用的机制可能是基于以下几个方面：①白细胞介素10抑制多种炎症相关性细胞因子的合成与分泌，抑制多种免疫细胞的活化与增殖，是体内一种具有抗炎和免疫调节作用的细胞因子，因此理论上对关节炎的炎性病变具有抑制和调节作用^[1-3]。②外源性白细胞介素10补充关节炎患者体内白细胞介素10的含量，纠正患者体内白细胞介素10的相对缺乏，有助于病情的改善^[4-6]。③白细胞介素10对关节软骨具有保护和修复作用^[7-10]。

3.2 基因治疗方法的实现   基因治疗实施中，导入基因的方法有2种，一种是间接体内疗法，即在体外将外源基因导入靶细胞内，再将这种基因修饰过的细胞回输病人体内，使带有外源基因的细胞在体内表达相应的产物，以达到治疗疾病的目的。另一种是直接体内疗法，即将外源基因直接导入体内有关的组织细胞使其进入相应细胞并进行表达。根据外源基因导入体内所选择的组织和部位的不同，又可以分为全身性和局部性基因治疗两种。全身性治疗多数选择静脉注射、肌肉注射或皮下注射的方法，虽然外源基因转染和表达的成功率较高，但全身组织的治疗暴露广泛，可能存在毒副作用明显的不足。在较早期进行的1项全身性白细胞介素10基因治疗关节炎的研究中，Apparailly等^[11]用腺病毒载体介导白细胞介素10基因治疗鼠胶原诱导性关节炎。Ⅱ型胶原免疫诱导后的第30天（此时为胶原诱导性关节炎开始发病期），给予实验动物DBA/1鼠静脉注射一定剂量的编码病毒白细胞介素10的复制缺陷腺病毒重组载体，发现鼠血清中白细胞介素10的浓度显著升高，实验动物关节炎的发病率降低、症状减轻。随注射剂量的加大，对关节炎的抑制和保护作用随之增强。当局部关节内注射抗白细胞介素10单克隆抗体后，这种关节的保护作用被中和或减弱。而接受无病毒白细胞介素10基因的空白载体和未接受基因转移治疗的对照组实验动物的关节炎症状均比治疗组明显地加重，证实白细胞介素10治疗关节炎的确存在积极的作用。在另外进行的一项实验中，Kim等^[12]在实验动物DBA/1鼠关节炎起病前和起病后，分别给予静脉单一和联合注射编码病毒白细胞介素10可溶性肿瘤坏死因子受体的重组腺病毒载体，发现联合治疗的协同治疗作用显著，病变关节数目明显减少、病情严重程度降低，抑制或缩短病程进展。而单独应用可溶性肿瘤坏死因子受体基因治疗，对胶原诱导性关节炎无显著影响。单独应用白细胞介素10基因治疗，作用则较弱。实验结果证明，联合进行可溶性肿瘤坏死因子受体和白细胞介素10基因治疗可通过二者的协同作用更好地实现治疗目的。Miyata等^[13]首先对实验动物皮下预防注射编码白细胞介素10的巨细胞病毒重组质粒载体，对照组接受空白质粒或不进行预防注射，然后用牛Ⅱ型胶原和弗氏完全佐剂免疫诱导动物产生胶原诱导性关节炎。发现实验组动物关节炎程度、组织病理学损害程度和IgG2a(Th1型)/IgG1（Th2型）的比率均较对照组减轻，提示白细胞介素10基因治疗关节炎可通过对TH1免疫反应的抑制发挥保护作用。Woods等^[14]在类似的研究中则采用了鼻内给药方式，通过鼻黏膜的吸收作用将编码白细胞介素10的重组质粒导入体内，与静脉注射基因导入途径的实验所观察到的关节炎治疗效果基本一致，为多途径导入目的治疗基因提供了思路。

如何实现外源基因的良好表达，增强基因治疗的效果，不同的学者对不同的方法进行了研究。Deleuze等^[15]采用肌肉注射的方法当肌肉组织表达分泌了具有治疗作用的蛋白表达产物白细胞介素10后，给予肌肉组织一定频率和强度的电刺激，可增强白细胞介素10的合成与分泌，肌肉组织中的白细胞介素10 mRNA和蛋白表达水平持续升高达84 d左右。Saidenbery-Kermanach等^[16]对胶原诱导性关节炎鼠的胫骨旁肌肉组织注射低剂量编码鼠白细胞介素10的巨细胞病毒载体质粒，并辅加方波脉冲电刺激，也观察到了相类似的效果。新近由Kuroda等^[17]完成的实验也证实肌肉注射后给予适度的的电刺激有助于治疗基因治疗性蛋白产物的表达。Apparailly等^[18]发现肌肉注射四环素诱导性启动子系统控制的重组腺相关病毒-白细胞介素10基因载体的同时，联合注射强力霉素，可增强基因转染的效率和表达，有助于治疗作用的发挥，改善治疗效果。