[摘要] 　目的　探讨T 淋巴细胞亚群在乙型肝炎患者外周血中的变化及其临床意义。　方法　采用多参数流式细胞仪检测乙型肝炎病毒携带者40 例(病毒携带组) 、慢性乙型肝炎30 例(慢性组) 、乙型肝炎肝硬化15 例(肝硬化) 及30 例健康人(对照组) 的外周血T 淋巴细胞CD3 及其亚群(CD4 、CD8) ,并将结果进行比较。　结果　与对照组比较,三组乙型肝炎患者的CD3 、CD4 及CD4/ CD8 比值均降低,差异有统计学意义( P < 0. 05) , CD8 明显增高( P < 0. 05) 。结论　乙型肝炎患者细胞免疫功能紊乱, T 细胞亚群的变化程度与病情进展有相关性。

乙型肝炎是一种免疫相关性疾病,机体感染HBV 后并不直接对肝细胞造成损伤,而是通过诱发机体免疫间接损伤肝细胞。同时,机体产生免疫反应以清除病毒,这种免疫反应主要通过淋巴细胞亚群的改变^{[ 1 ,2 ]} 。T 淋巴细胞的功能异常及亚群比例失衡所导致的组织损伤与乙型肝炎的发病有关,是乙型肝炎的发病机制之一^{[ 3 ]} 。本文应用流式细胞仪检测乙型肝炎患者外周血T 淋巴细胞亚群,探讨其临床意义。

1 　资料和方法

1. 1 　研究对象　选择乙型肝炎病毒携带者40 例、慢性乙型肝炎30 例、乙型肝炎肝硬化15 例为研究对象。乙型肝炎病毒携带者组中男性23 例,女性17 例,年龄7～65 岁,慢性乙型肝炎组中男性20 例,女性10 例,年龄18～71 岁。乙型肝炎肝硬化组中男性11 例,女性4 例。年龄27～75 岁。临床诊断符合2000 年9 月西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准^{[ 4 ]} 。正常对照组30 例,选自门诊健康体检者。男性20 例,女性10 例,年龄22～61 岁。

1. 2 　方法

1. 2. 1 　抽取静脉血1 mL 于EDTA - K3 抗凝管中,充分摇匀。

1. 2. 2 　荧光标记　在测定管中加入荧光标记McAb (CD3 -PECY5/ CD4 - FITC/ CD8 - PE) 20μl ,待测全血标本100μL ,调节细胞浓度约10 ×109/ L 。每份标本设一同型对照,对照管中加入鼠抗人( IgG1 - PECY5/ IgG1 - FITC/ IgG1 - PE) 20μl ,待测全血标本100μL ,混匀,室温避光反应20 min 后,以Q- Prep 仪溶血,上机检测。

1.2. 3 　检测　FCM 激光为冷亚激光, 波长488nm ,采用flow - check 调整光路,用同型对照调电压,以SSC 为横座标,FSC 为纵座标,构建散点图,在散点图上采用设门技术(gating) 分析淋巴细胞群中CD3 , CD4 和CD8 抗原表达情况,每份标本计数1 ×105 个细胞。

1. 3 　仪器和试剂　荧光标记单克隆抗体: 鼠抗人CD3 -PECY5/ CD4 - FITC/ CD8 - PE 三色标记和同型对照鼠抗人IgG1 - PECY5/ IgG1 - FITC/ IgG - PE 均购自法国Immunotech 公司。Beckman Coulter EPICS XL 型流式细胞仪购自美国Beckman - Coulter 公司。

1. 4 　统计学方法　所有数据经SPSS 11. 0 统计软件处理,结果以均数±标准差( -x ±s) 表示,两组间比较采用两样本均数t 检验。