肌钙蛋白是组成横纹肌细肌丝的结构蛋白, 其亚单位I、T 和C 组成复合物, 在肌肉收缩和舒张过程中起着重要调节作用。其中, 肌钙蛋白I( cTnI) 经大量的研究, 已被证实为心肌损伤最特异、最敏感的血清标志物之一^{[ 1]}。正常人血液中含量一般低于0.3 μg /L, 当心肌细胞胞膜完整性因缺血或缺氧等受到破坏时, 游离的cTnI 可迅速透过细胞膜进入血流。因此, 在发病初期, 快速、灵敏且准确地测定人血中的cTnI 及其变化趋势对于急性心肌梗死的诊断、急性冠状动脉综合征的危险分层、监测各种因素导致的心肌损伤等有着重要的临床意义。本文就cTnI 的检测方法综述如下。

1 酶联免疫吸附法( ELISA)

ELISA 是1971 年瑞士学者Engrall 等首次报道的一种酶标固相免疫测定技术。该方法伴随着抗体制备技术、酶免疫技术等的不断发展, 现已成为一种经典的、被广泛应用于临床的免疫测定技术。国外, Cummins、Larue、Cho 等^{[ 2]} 相继对ELISA法测定血清cTnI 进行了一系列研究, 并在前人研究的基础上对测定方法作出了各自的改进, 如以单克隆抗体取代多克隆抗体包被固相载体, 以辣根过氧化物酶( HRP) 取代碱性磷酸酶( ALP) 作为标记酶, 使检测灵敏度由4 μg /L 精确至0.1 ～0.2μg /L。国内, 李志梁、李瑞等^{[ 3- 4]} 将生物素- 亲和素放大技术引入ELISA 法中, 用于检测肌钙蛋白。其用生物素标记抗体, 以链霉亲和素连接HRP, 利用链霉亲和素可以结合多个生物素的方法实现灵敏度的提高。但是, 由于cTnI 血清含量偏低, 临床需快速检测, 而ELISA 法存在着测定周期偏长、灵敏度相对较低、线型范围偏窄等诸多不足, 因而限制了该法在cTnI 检测方面的进一步应用。

2 化学发光法

化学发光法是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术。以该法检测cTnI 具有代表性的产品是美国Beckman Coulter 公司的Access 微粒子化学发光免疫分析系统^{[ 5]} 和Bayer 公司的ACS-180 电化学发光免疫分析系统^{[ 6]}。前者采用了双抗体一步夹心酶免疫分析的方法, 以化学发光剂3-( 2′- 螺旋金刚烷) -4- 甲氧基- 4-( 3″- 磷酸氧基) 苯- 1, 2- 二氧杂环丁氨( AMPPD) 为底物,用cTnI 单克隆抗体包被的磁性微粒为固相载体, 并用ALP 标记的cTnI 另一单抗作为酶标抗体, 检测时, 待测抗原与包被在固相载体的抗体及ALP 标记的抗体形成夹心复合物, 发光剂AMPPD在ALP 催化下脱去磷酸根基团而发光。该系统最低检出浓度为0.03 μg /L, CV< 5%, 准确度可达97.8%。

ACS-180 电化学发光免疫分析系统则以细小的顺磁性微粒为固相载体, 以电化学发光剂吖啶酯标记抗体, 待加入氧化剂H2O2 和NaOH 后, 吖啶酯则可在不需要催化剂的情况下分解、发光, 光的强度与待测抗原的浓度成正比。该系统灵敏度接近0.15 ng /mL, 回收率为96.97% ～102.60%, 交叉污染率为0.19%。Baevsky 等^{[ 7]}对上述两个系统进行了比较研究, 结果显示: Access 和ACS-180 检测仪的敏感性分别为97%、63%, 特异性分别为18%、87%, 两者的相关系数r = 0.89, 后者较前者用于检测cTnI 更为精确。