3.2 苯唑青霉素纸片扩散法  用含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上, 纸片吸收琼脂中的水分后向周围以递减的梯度浓度形式扩散, 在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制, 形成透明的抑菌圈, 抑菌圈的大小反映了测试菌对测定药物的敏感程度。该方法曾经被广泛应用, 但由于新的变异株不断出现, 使得该方法的检出率下降。所以, 目前已被头孢西丁纸片法所取代。

3.3 头孢西丁纸片法  参照2007 年美国国家临床实验室标准化委员会( NCCLS) 的标准进行^{[ 10]} , 挑取单个菌落调整菌悬液的浊度为0.5 麦氏单位, 均匀涂布于MH 平板, 贴上30 μg 头孢西丁纸片, 在37℃下培养24 h 观察结果, 抑菌环直径≤ 24 mm,判定为MRSA。此方法特异性100%, 灵敏度98.8%, 是继苯唑青霉素纸片扩散法之后应用最广的鉴定方法。

3.4 MRSA 检测鉴定专用产色培养基(MRSA-ID)  通过菌落产生α- 葡萄糖苷酶的原理及添加头孢西丁的作用, MRSA 在此培养基上可直接呈现出绿色菌落, 从而达到鉴定的目的。使用MRSA-ID 鉴定MRSA, 结果易于判断, 灵敏度和特异性也较高, 培养鉴定分离可一步完成, 因此用时较短, 可在18 ～24 h内出结果, 但由于MRSA-ID 可选择性抑制大部分葡萄球菌以外的细菌生长, 同时抑制酵母菌, 从而缩小了它的使用范围, 所以仅仅适用于特殊情况下的MRSA 的筛查, 而不能用于可疑患者的一般培养^{[ 11]}。

3.5 抗青霉素结合蛋白( PBP) -2a 胶乳凝集法  应用由mecA基因编码的PBP-2a 抗体的胶乳凝集实验法来检测MRSA。特异性99.2%、灵敏度100%^{[ 12]} , 被NCCLS 推荐为可替代PCR 检测的鉴定方法。

3.6 自动鉴定仪  包括VITEK 系统、ATB 系统、Microscan 系统、Sensiter ARIS 等。其特点是可在短时间内鉴定出结果, 但对那些生长缓慢或表达迟钝的MRSA, 可能会出现漏报或误报的现象, 又因为鉴定的成本高, 需要大型仪器, 所以很难在基层医院开展。

3.7 PCR 检测技术  是在一定条件下, 对mecA 基因DNA 序列进行特异性扩增, 然后经琼脂糖电泳, 在紫外灯下观察有无与阳性对照相同的区带, 而达到鉴定的目的。PCR 技术灵敏度较高, 只要有微量的待测基因即会出现阳性结果, 但也会因实验室污染而出现假阳性或是因耐药基因是沉默基因而出现假阳性, 又因为它需要特殊的仪器, 对工作人员的要求较高, 所以并不适用于一般实验室。

此外, 还有对流免疫电泳法、脉冲凝胶电泳法、染色体限制性内切酶图谱分析法等。

在以上这些方法中, 头孢西丁纸片法应用最为广泛, 但由于其用时较长, 所以并不是理想的检测方法。而MRSA-ID 和抗PBP-2a 胶乳凝集法虽然能够快速鉴定出MRSA, 能够为降低感染的人数、调整治疗用药、控制MRSA 的耐药水平、节约治疗成本等提供有利的条件, 然而由于检测成本较高或是使用范围较窄, 而不利于推广应用。
因此, 研究出快速、准确、廉价、使用范围广的检测方法将会是我们今后努力的方向。

4 MRSA 感染的治疗

由于MRSA 是一组对甲氧西林及所有头孢菌素和碳青霉烯类、青霉素+青霉素酶抑制剂类抗生素等耐药的葡萄球菌,所以它的治疗有其独特性。

4.1 糖肽类  万古霉素和teicoplanin 一直被认为是治疗MRSA 最有效的方法, 然而1996 年日本报道了第1 例对万古霉素中介的MRSA; 随后在2002 年, 第1 例对万古霉素耐受的葡萄球菌( VRSA) 在密歇根州被发现。此后, 日本、法国、巴西等国家也证实了VRSA 的存在。而teicoplanin 是另一类糖肽类抗生素, 广泛用于革兰阳性菌感染的治疗, 与万古霉素相比, 它的半衰期更长, 对抗万古霉素的细菌也有一定的抑菌作用, 然而金黄色葡萄球菌对teicoplanin 更容易产生耐药变异株^{[ 13]}。