国际刊物Virology Journal近日发表了中国科学院上海巴斯德研究所关于构建手足口病相关的柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)感染性克隆的最新研究成果。
CVA16和人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的主要病原体,因此,了解CVA16和EV71基因组中各个区域的功能,对加强CVA16和EV71的病毒学和免疫学研究,尽快研制出有效的预防和治疗方法,保障中国儿童的生命健康有非常重要的意义。然而,EV71和CVA16均属于RNA病毒,直接对它们的基因组进行遗传操作非常困难。
上海巴斯德所研究生刘菲、刘庆伟、蔡一村等在黄忠研究员指导下,通过分子生物学手段,提取了CVA16病毒的基因组RNA,并且进行体外反转录操作获得与病毒基因组相对应的cDNA序列,将此序列构建到一个表达载体中,获得携带感染性cDNA克隆的质粒。利用该质粒可以包装出具有感染性的拯救病毒。通过观察细胞病变、蛋白质印迹以及免疫荧光等方法证实,拯救病毒与野生病毒的功能完全一致。同时,测序结果还表明,拯救病毒的基因组具有稳定的遗传性。
利用新构建出的感染性克隆,科研人员可以方便地对RNA病毒的基因组进行体外操作,从而对病毒的结构、功能等多方面进行研究。从更长远来看,CVA16感染性克隆为今后阐明病毒的致病性,开发针对EV71/CVA16的预防性疫苗和治疗性药物等提供了研究基础。
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