214 靶向输送
要提高非病毒转基因载体的靶向性运送,主要策略是连接特异的配体,因为不同细胞表面有不同的配体表达,如常见配体有转铁蛋白、LDL、乳糖、叶酸、EGF、单克隆抗体等[ 16 ] 。但是全分子配体相对分子质量较大,结构复杂,获取较困难,随着噬菌体展示技术的发展,许多相应配体的功能肽被研制出来,由于其结构相对简单、合成方便、价格低等优点,从而在很大程度上取代了配体分子,被用于载体的靶向技术研究。Ge等[ 17 ]为提高杆状病毒在B淋巴细胞的转导作用,用一个10肽( EDPGFFNVE I)修饰杆状病毒表面蛋白gp64 /gp350,形成病毒重组体vAc2gp350EGFP,由于此10肽能结合B淋巴细胞表面蛋白CD21,因而极大地提高了杆状病毒在B 淋巴细胞的转染效率。人淋巴瘤细胞系Raji, HR1,BJAB,DG75和猴B淋巴细胞B9528具有表面蛋白CD21 或其同族物,因为病毒重组体vAc2gp350EGFP在这些细胞转染都很高。RGD 肽是一类含有Arg2Gly2Asp 的小肽,广泛存在于多种生物体内及同一种生物体的各种组织中。利用其修饰腺病毒载体外壳蛋白,从而提高了腺病毒载体对肿瘤细胞的靶向性。另外,提高载体靶向性的策略除了与特异性配体结合外,还可以根据靶细胞的生物学特点来构建载体。如Kawamura等[ 18 ]利用在多种疾病中细胞特异基因表达体系,细胞内特定信号通路过度激活的特点,构建了一种新的载体,此载体由一条稳定的主链和一条聚阳离子多肽侧链组成,其靶向性依赖于该载体上一条作为半胱天冬酶( caspase) 23 蛋白酶底物的H IV21 Tat多肽。研究表明,该多肽和PE I形成的新聚合物能够浓缩目的基因DNA,通过静电作用进入相应细胞后,由于caspase23的酶切作用,该多肽从载体上被酶解,目的DNA进一步释放入核,该载体在caspase23过分激活的疾病细胞内相对高表达,从而获得治疗靶向性。通过荧光标记证实其在小鼠的成纤维细胞有较高的表达,且无凋亡刺激。近年来进展较快的是肽/核酸( PNA)技术的应用[ 19 ] , PNA是一种聚酰胺,在结构上模拟了DNA,其骨架不是DNA的磷酸脱氧核酸,而是N 2( 22氨乙基)甘氨酸的重复单位,碱基则通过亚甲基羰基连接于N 2(22氨乙基)甘氨酸上。如J? rver等[ 20 ]描述的一种PNA 新合成方法,多肽PTD24 ( YARAAAR2QARA)与反义PNA配对结合,可以靶向抑制bcl22,化合物1, 4, 7, 102四氮杂环十二烷2N, N ′, N ′, N″2 四乙酸(DOTA)的衍生物能够促进放射金属环与PNA螯合,从而在放射治疗中可被追踪观察。此外PNA还可以连接上相应功能肽,从而赋予结合质粒相应的靶向转运等功能。
215 疾病治疗
随着生物技术的发展,多肽作为药物在临床上的应用越来越广泛,相应的疾病治疗研究也日益受到重视。但与传统的小分子药物相比,多肽具有稳定性差,体内半衰期短等特点。因此,研制开发多肽类药物新剂型和制剂新技术,使此类药物更好地用于疾病的预防和治疗, 已成为现代药剂学的热点[ 21 ] 。Kim 等[ 22 ] 验证人凝血素22 衍生抗炎肽NSA9 (NSAVQLVEN)通过调节核因子NF2κB活性,抑制一氧化氮和前列腺素E2 ( PGE2 )等在小神经胶质细胞的合成,治疗神经退行性疾病。来自乳蛋白的肽类: C12肽( FFVAPFPEVFGK)、C721 肽(AVPYPQR ) 、C722 肽( KVLP VPQ ) 和β2lactorphin (ALPMH IR)等通过抑制血管紧张素转换酶,进而影响肾素2血管紧张素2醛固酮系统,来实现对血压的调节, 治疗高血压病[ 23 ] 。Gusarova等[ 24 ]用短肽SCALAFVN (ARF37244 )抑制小鼠肝癌诱导物Foxm1在细胞中过表达,一定剂量注射4 周后,经免疫化学染色和荧光检测,小鼠体内的癌瘤生长速率明显降低,并没有损害邻近正常组织,还发现此肽能够诱导人类肝癌细胞的凋亡。Dasgup ta等[ 25 ]利用Raf21 链中部分多肽( ISNGFGFK) 干扰Raf21与癌细胞的结合抑制癌细胞在体内生长。此肽可以抑制癌细胞的生理周期和细胞的增殖,从而达到治疗效果,给荷有肺腺癌的裸鼠注射结合此短肽的Raf21, 15 d后裸鼠体内的瘤体积减少了79%,经组织病理学检查,微血管数量减少了57%。Melis等[ 26 ] 用生长激素抑素受体类似物肽[ 177LU2DOTA0 , Tyr3 ]octreotate治疗神经性内分泌转移瘤,研究小剂量注射[177LU2DOTA0 , Tyr3 ]octreotate后生长激素抑素受体( sst22 ) 在小鼠胰腺瘤(CA20948) 中的变化模型, 在给小鼠接种胰腺癌16 d后,将185MBq [ 177LU2DOTA0 , Tyr3 ] octreotate注射到长有瘤的小鼠体内,注射后40 d发现,得到__疗的胰腺癌细胞内sst22密度减少,而未治疗的瘤体内sst22较对照组高2～5倍。
3 展望
多肽无论在功能蛋白质组学,还是在医学治疗领域的研究均具有一定的现实意义。目前,多肽已应用于癌症、艾滋病以及中枢神经系统疾病的治疗。多肽作为非病毒转基因载体的组件,发挥了多方面的功能。此外,将多肽引入非病毒载体,也有利于研究者对非病毒载体的转染机制的深入认识。随着多肽合成和分离技术的发展,更多的功能多肽进入研究领域,将有力促进非病毒载体的研究。
