【摘要】　目的　探讨细胞间黏附分子1 ( ICAM-1)基因多态性与HBV感染不同临床结局之间的相关性。方法　应用病例2对照研究和聚合酶链反应2序列特异性引物法( PCR-SSP)检测118例慢性持续性HBV感染患者(包括无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎、乙肝后肝硬化患者)和60例HBV急性自限性感染者的ICAM-1基因G241R (G/A) 、K469E (A /G)两个位点的多态性,比较各组间基因型和等位基因频率,并对数据进行统计分析。结果　① ICAM-1 G241R (G/A)位点总GG基因型频率在HBV慢性持续性感染组高于急性自限性感染组,但差异无统计学意义(χ2 = 1.38, P > 0.05) 。② ICAM-1 K469E (A /G)位点,进展性肝病组(慢性乙型肝炎和肝硬化)总KK基因型和总K等位基因的频率与无症状携带者组和自限性感染组相比显著增高(χ2 = 8.60, P < 0.05;χ2 = 5.07, P < 0. 05) ,而在自限性感染和无症状携带者之间却无显著差异。结论　携带ICAM-1 K469E KK基因型和K等位基因的患者容易进展成慢性乙型肝炎甚至肝硬化,可致慢性HBV感染患者病情进展。

乙型肝炎病毒(HBV)感染机体后可形成不同的临床结局,严重威胁着人类的健康。目前认为其原因除了与HBV本身(如HBV基因型、病毒变异、病毒含量) 、环境因素等有关外,宿主机体的免疫状况及其相关基因的遗传易感性起着非常重要的作用。

ICAM-1属免疫球蛋白超家族成员,在乙型病毒性肝炎的发病机制中起着重要的作用^{[ 1 ]} 。ICAM-1基因具有多态性,目前已发现ICAM-1基因多态性与一些炎症和免疫相关性疾病有关,如原发性硬化性胆管炎、心脏移植后的血管病变等^{[ 2, 3 ]} 。但与HBV感染的相关性研究目前国内外还很罕见。因此,我们采用聚合酶链反应2序列特异性引物法( PCR-SSP) ,对不同临床结局的HBV感染患者的ICAM-1 G241R及K469E两个位点的多态性进行了检测,以探索ICAM-1基因多态性与HBV感染间的关系,期望能够为HBV感染不同临床结局的发病机制提供新的依据。

1　对象与方法

1. 1　对象　所有研究对象均为2006 年12 月～2007年12月于温州医学院附属第一医院住院或门诊就诊的病人。严格按照中华医学会肝病学分会和感染病学分会2005年制定的《慢性乙型肝炎防治指南》及2000年的《病毒性肝炎的防治方案》进行疾病的规范化诊断,并分为如下几组: ① 自限性HBV 感染组( spontaneous recovery, SR) : HBeAb、HBcAb、HBsAb中至少两项阳性,但HBsAg及HBV-DNA均为阴性,且均未接种过乙肝疫苗,为正常对照组, 60例。②慢性持续性HBV感染组(persisting chronic infection, PC组) :共118 例,包括无症状HBV携带者( asymp tomatic carriers, AsC)组36 例和进展性肝病组82 例, 其中慢性乙型肝炎( chronic hepatitisB , CH ) 50例、肝硬化( livercirrhosis,LC) 32例。所有研究对象均为无亲缘关系的汉族人,均无原发性心、肺、肾及高血压等病史,排除其他慢性肝病的致病因素存在,如非HBV病毒感染、自身免疫性肝炎、酒精性肝炎、脂肪肝等。所有入选对象的临床特征见表1。表1

1. 2　方法

1. 2. 1 　引物设计与合成: 从GenBank下载人ICAM-1基因全部序列(序列号NT_011295, gi: 29801560)应用PR IMER 5软件并参照文献^{[ 4 ]} ,针对G241R和K469E两个位点设计和合成引物, G241R位点引物:上游1: 5′-GTG GTC TGT TCC CTG GAC G23′,上游2: 5′- GTG GTCTGT TCC CTG GAC A-3′,下游: 5′2 GGC TCT GGT TCCCCA GTA TT-3′; K469E位点引物:上游1: 5′- GCA CATTCA CGG TCA CCT T-3′,上游2: 5′- GCA CAT TCA CGGTCA CCT C-3′,下游: 5′- AAG GAT GGC ACT TTC CCACT-3′;内参照引物: 上游: 5′- CTT CAA CAC CCC AGCCAT GTA C-3′,下游: 5′- CCT CAG GGC AGC GGA ACC-3′。