人类免疫缺陷病毒分子诊断与相关研究进展

www.yongyao.net　　2010-1-8 12:00:45　　来源：　　责任编辑：

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5. 2. 3 　连接酶介导的核酸分子识别:DNA 连接酶对底物的特异性要求较DNA 聚合酶更高,DNA 连接酶可连接双平末端的核酸分子,但这一效率低于粘性末端双链DNA 分子,而后者的效率又低于对双链DNA 的缺口连接,DNA 连接酶的特异性约为10 - 9 。上述方法均是利用连接酶的高特异性识别并连接与模板DNA 配对的探针缺口,以检测模板DNA 的特定点突变或SNP 基因型。主要方法有3种:寡核苷酸连接酶突变检测反应,连接酶链式反应和连接酶多重探针放大技术^{[16 ]} 。由于连接酶效率太低,上述方法或直接与聚合酶链式反应偶联,或自身包含链式反应。其中,连接酶多重探针放大技术通过引入通用PCR 引物对,有利于实现PCR反应的多重化,对检测已知突变有很大优越性。

5. 2. 4 　连接酶- 高保真聚合酶偶联的分子识别开关: 连接酶- 高保真聚合酶偶联的分子识别开关利用多种酶反应的偶联,即DNA 连接酶使半引物形成完全的引物和利用5′→3′DNA 聚合酶使已形成的完全引物开始延伸以得到扩增产物,形成一种对核酸分子具有高度特异性识别能力的新方法。这一新方法的高特异性在理论上为10 - 19 - 10 -32 ,这一高特异性是在分子识别中所具应用价值的基础。其关键是利用偶联两种不同的酶反应过程对同一待识别的核酸分子进行4 次串联的分子识别。该方法在一定程度上较使用单一识别机制的核酸识别方法具有更高的特异性,同时还可高通量化,并与现有的核酸检测平台有广泛的适应性,既可用于普通PCR 结合琼脂糖凝胶电泳,也可用于毛细血管电泳系统,适时PCR 系统和DNA 芯片系统。因而若该方法用于HIV 检测中将具有很大的实际应用价值。

《自然·遗传学》新近发表一项调查报告,未来5～10 年内有望改善人类、尤其是发展中国家健康状况的十大关键生物技术中分子诊断技术居首位^{[17 ]} 。近年,国内外在HIV 分子诊断技术有了长足的进步,检测结果的可靠性将大大提高。随着HIV感染分子诊断技术在高特异性、高敏感性、快速、自动化等方面的进一步提高,HIV分子诊断可望成为感染与否的诊断标准之一,并通过对HIV突变及个体遗传差异的检测指导抗病毒治疗,充分发挥血清学技术不可替代的优越性,为人类控制HIV 感染发挥重要作用。

参考文献
1 张京海,李继霞,陈世敏,等. HIV 感染的实验室诊断研究进展. 放射免疫学杂志,2007 ,20 (2) :136-139.
2 Robertson DL ,Anderson J P ,Bradac JA. HIV21 nomenclature proposal. Science ,2000 ,288 (5463) :55-56.
3 李素敏,王润田,赵云珠,等. 输血相关HIV 感染的免疫学检测进展. 中国输血杂志,2004 ,17 (3) :204-206.
4 季伟. 人类免疫缺陷病毒基因变异的临床意义. 国外医学病毒学分册,1999 ,6 (1) :13-16.
5 Murphy DG,Cote L ,Fauvel M. Multicenter comparison of Roche COBAS AMPL ICOR MONITOR version 1. 5 , Organon Teknika NucliSens QT with Extractor , and Bayer Quantiplex version 3. 0 for quantification of human immunodeficiency virus type 1 RNA in plasma. J Clin Microbiol ,2000 ,38 (11) :4034-4041.
6 Stevens W, Horsfield P , Scott L E. Evaluation of the performance of the automated NucliSENS easyMAGand EasyQ systems versus the Roche AmpliPrep2AMPL ICOR combination for high2throughput monitoring of human immunodeficiency virus load. J Clin Mi2
crobiol , 2007 ,45 (4) :1244-1249.
7 Collins ML , Irvine B ,Tyner D. A branched DNA signal amplification of nucleic acid targets below 100 molecules/ ml. Nucleic AcidsRes ,1997 ,25 (15) : 2979-2984.
8 Gottesman BS , Grossman Z ,Lorber M. Comparative performance of the Amplicor HIV21 Monitor Assay versus NucliSens EasyQ in HIV subtype C2infected patients. J Med Virol ,2006 ,78 (7) : 883-887.
9 McClernon DR ,Vavro C ,St Clair M. Evaluation of a real2time nucleic acid sequence2based amplification assay using molecular beacons for detection of human immunodeficiency virus type 1. J ClinMicrobiol ,2006 ,44 (6) :2280-2282.
10 Liu Q ,Sommer SS. Pyrophosphorolysis - activated polymerization(PAP) : application to allele2specific amplification. Biotechniques ,2000 ,29 (5) :1072-1076.
11 Liu Q , Sommer SS. PAP : detection of ultra rare mutations depends on Poligonucleotides :“sleeping beauties”awakened by the kiss of pyrophosphorolysis. Hum Mutat ,2004 , 23 (5) :426-436.
12 Liu Q ,Nguyen VQ ,Li X. Multiplex dosage pyrophosphorolysisactivated polymerization : application to the detection of heterozygous deletions.Biotechniques ,2006 ,40 (5) :661-668.
13 Zhang J ,Li K,Liao D. Different applications of polymerases with and without proof reading activity in single2nucleotide polymorphism analysis. Lab Invest , 2003 ,83 (8) :1147-1154.
14 Zhang J , Li K. On2off regulation of 3′exonuclease excision to DNA polymerization by Exo + polymerase. J Biochem Mol Biol ,2003 ,36 (6) :525-528.
15 Zhang J ,Li K,Pardinas JR. Proofreading genotyping assays mediated by high fidelity exo + DNA polymerases. Trends Biotechnol ,2005 ,23 (2) :92-96.
16 Edelstein RE ,Nickerson DA , Tobe VO. Oligonucleotide ligation assay for detecting mutations in the human immunodeficiency virus type polgene that are associated with resistance to zidovudine , didanosine , and lamivudine.J Clin Microbiol ,1998 ,36 (2) :569-572.
17 Daar AS , Thorsteinsdóttir H , Martin DK. Top ten biotechnologies for improving health in developing countries. Nat Genet ,2002 ,32 (2) :229-232.