1　AS与HLA-B₂₇的关系

HLA是机体内具有紧密连锁、高度多肽性的抗原系统,它不仅与器官移植排斥反应起重要作用,而且与许多疾病呈密切相关。HLA-B₂₇基因是人类主要组织相容性复合物Ⅰ类分子B位点上的等位基因,编码的HLA-B_{2 T}的相对分子质量为43 ×107。它与AS、Reiters综合征、关节炎性银屑病等都具有相关性,因此, HLA-B₂₇的检测是诊断AS的一个特异指标。

1. 1　HLA-B₂₇检测　目前,用于检测HLA-B₂₇的方法有4种:经典的血清学分型技术(微量淋巴细胞毒试验技术) 、分子生物学技术如DNA分型技术(聚合酶链反应2特异性序列引物)以及磁珠酶免疫分析法。

1. 1. 1　微量淋巴细胞毒试验技术　微量淋巴细胞毒试验的原理为:活性淋巴细胞与连接补体的单克隆抗体以及补体共同孵育,若特异性抗体能识别出淋巴细胞上的抗原标记,则抗体上的可变区蛋白将结合形成抗原抗体复合物。抗原抗体复合物形成后,加入补体,经反应导致细胞打孔并致细胞溶解。死亡的淋巴细胞失去活性即反应呈阳性,当加入一步法荧光终止剂如FQAE (含有吖啶黄与溴化乙啶)时,在荧光显微镜下吖啶黄将活细胞的细胞膜染成绿色,溴化乙啶通过破损的细胞膜将细胞核染成红色。在荧光显微镜下,阴性淋巴细胞为边缘整齐、光亮、绿色细胞(活细胞) ,阳性淋巴细胞为边缘不齐、红色细胞(死细胞) 。并以此为评价标准进行打分和结果判断。

1. 1. 2　聚合酶链反应2特异性序列引物技术　DNA分型技术与血清学分型技术相比有以下优点: ①标本用量少,且可长期保存; ②由于加入了429 bp HGH内对照引物,使实验更加可靠,可避免出现漏诊或假阳性反应; ③实验灵敏度和特异度高、快捷、稳定性好。

1. 2. 3　流式细胞仪检测法　近年来,随着流式细胞仪的应用普及,目前该方法已被应用到HLA-B₂₇的检测。因其更加方便快捷,有取代以往微量淋巴细胞毒试验法的趋势。但由于价格昂贵,推广受到一定程度的限制。其测定原理为:应用荧光标记的HLA-B₂₇抗体(如HLA-B₂₇-异硫氰酸荧光素)与待测标本淋巴细胞表面的HLA-B₂₇抗原-进行抗原抗体反应,待仪器校正后,上机检测其异硫氰酸荧光素的荧光强度,若平均荧光强度大于标准微球主峰的荧光强度即为阳性,反之则为阴性。

1. 2. 4　磁珠酶免疫分析法　磁珠酶免疫分析法是近年推出的用于检测HLA-B₂₇的方法。国内学者对磁珠酶免疫分析法检测HLA-B₂₇的可靠性进行过探讨,结果显示,磁珠酶免疫分析法检测HLA-B₂₇的阳性率(90. 9% )高于微量淋巴细胞毒试验法(87. 9% ) ,但差异无显著性,磁珠酶免疫分析法检测的敏感度为90. 0% ,特异度为95. 7% ,阳性预测值为94. 7% ,阴性预测值为91. 7%[ 5 ] 。由此可见,磁珠酶免疫分析法检测HLA-B₂₇有较高的敏感性和特异性,且具有标本用量少、易于保存、反应时间短、结果稳定、易判断、不需特殊设备、影响因素少、适合批量测定等优点,有很广的应用前景[ 6 ] 。

1. 3　HLA-B₂₇与AS的相关性　HLA-B₂₇是已知的HLA与AS疾病关联中最强的和最典型的,其相对危险度达87. 4%。家系分析提示,在HLA-B₂₇阳性的AS患者一级亲属中, HLA-B₂₇阳性者占31. 3% ,并且这些亲属患AS的危险性高出正常家庭对照组的10. 8 倍[ 7 ]。在我国人群中, HLA-B₂₇阳性者占3%～7% , AS患病率为0. 3% ,而发病早期因临床症状不典型及影像学检查未有相应改变, 常被误诊并延误治疗。HLA-B₂₇与AS呈高度相关性,可作为辅助诊断AS的可靠指标。但HLA-B₂₇阳性不能确诊患者是否患AS,因为非AS患者也有2%左右的阳性率。但当临床症状和体征及影像学检查怀疑有AS时, HLA-B₂₇阳性可作为诊断指标。有文献认为,如果患者诊断为AS的可能性为50% ,若患者HLA-B₂₇为阳性, 则诊断AS 的概率可提高到95%左右; 若该患者HLA-B₂₇为阴性,则患AS的概率降至3%左右[ 8 ]。但HLA-B₂₇阴性患者如临床表现和影像学检查符合诊断标准,也不能排除AS的可能。另外,类风湿性关节炎患者中不少人常伴AS,因此对确诊为类风湿性关节炎的患者应进行HLA-B₂₇的检测,以免漏诊。