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化学发光免疫分析技术应用研究进展
www.yongyao.net  2010-1-7 11:13:09  来源:  责任编辑:
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CLEIA 已经被欧盟列为检测牛海绵样脑病的快速检测手段之一,欧盟当局也准备把CLEIA 推广至小型反刍动物如绵羊,作为绵羊瘙痒病等此类疾病的快速检测手段。Buschmann 等[9 ]用牛海绵样脑病的4 种快速检测方法(CLEIA、间接ELISA、夹心ELISA 和Eestern blot) 检测了来自德国的48 只绵羊及来自法国的209 只绵羊和19 只山羊,CLEIA 检测结果与确诊试验非常吻合,而采用其他3 种方法,有53只绵羊与确诊试验的结果不符。Bolea 等[10 ] 用CLIA 和Western blot 两种快速检测方法与检测绵羊瘙痒病抗原,即朊病毒蛋白质的称为金标准的免疫组化技术进行比较发现,用此3 种检测方法都确诊为绵羊瘙痒病阳性的绵羊时,这3 种方法在绵羊脑的颈部脊髓和丘脑都可以检出朊病毒抗原蛋白,而在脑的闩部,只有免疫组化法可以检出朊病毒蛋白。西班牙国家参考中心认为CLIA 可以作为TSE 检测的辅助的筛查手段。

Greening 等[11 ]用RT-PCR 和CLEIA 进行了肠道RNA 病毒检测试验。他们在RT-PCR 过程中加入DIG-dUTP(地高辛标记的脱氧尿苷) ,把RT-PCR 产物和生物素标记的肠道病毒特异核酸探针加到用抗生物素蛋白链菌素的微孔板上,然后加入过氧化物酶标记的抗地高辛抗体,最后用ELISA 和CLEIA 进行检测。结果发现,CLEIA 对脊髓灰质炎病毒等肠道病毒具有非常高的灵敏度和特异性,他们认为CLEIA 应该被用于环境水样中肠道病毒的监测。

Vidziunaite 等[12 ]研究建立关于布鲁菌病和兔热病的增强型CLIA 方法。经研究,他们确定CLIA 检测体系的最佳条件为:包被抗体的浓度20μg/ ml ,配对抗体浓度200μg/ ml ,布鲁菌和兔热病检测线性范围分别为10~2 500 ng/ ml 和1~500 ng/ ml 。

Zamora 等[13 ]用CLIA 检测来自德国不同实验室的屠宰猪肉样品中沙门菌,用间接ELISA 作为对比方法。检测了超过1 350 份样品,CLIA 的敏感性和特异性分别为97. 3 %和95. 1 % ,而间接ELISA 的敏感性和特异性分别为96. 2 %和94. 6 %。但是用间接ELISA 检测脂多糖抗原时,与大肠杆菌和耶尔森菌存在交叉反应,而这种交叉在用CLIA 检测时不存在。Zammora[14 ]认为主要是因为CLIA 具有更宽的检测光谱,而使得免疫反应更特异。从整体数据上看,CLIA 与间接ELISA 具有较高的相关性。基于研究的结果,Zammora 认为CLIA 可作为屠宰猪肉中沙门菌抗体检测的参考方法。Zammora 等也用间接ELISA 和CLIA 检测鸡场中肠炎沙门氏菌,以建立一个监测鸡场中肠炎沙门氏菌感染的一个血清学检测体系。研究认为,间接ELISA 和CLIA 可用于监测没有免疫过肠炎沙门菌的鸡群的肠炎沙门菌的感染。

Kovacs 等[15 ]研究建立关于大肠杆菌O157∶H7的CLEIA 的检测试剂盒。10 倍稀释经24 h 培养的大肠杆菌肉汤培养基,用CLEIA 检测的灵敏度为103~104 个/ ml ,具有非常高的特异性;用新生霉素处理大肠杆菌O157∶H7 生牛肉培养菌落,然后42 ℃培养4 h ,用CLEIA 检测灵敏度为101~102 个/ ml ,并且也具有非常高的特异性。因此,Kovacs 认为此试剂盒适合筛测经选择性培育的大肠杆菌O157∶H7。

Singh[16 ]用ELISA 和液相CLEIA 检测取于猪和猫的血清样本中弓形体的IgG( Toxoplasma IgG, T-IgG) 。液相CLEIA 对来自猪和猫的临床样品和加料样本都可以灵敏地检测出其中的T-IgG,而ELISA 对猫的临床样本中T2IgG不能灵敏地检出。

Almeida 等[17 ] 试图建立关于南美洲锥虫病的CLEIA 的检测方法。CLEIA 检测锥虫病100 份确诊病例的敏感性为100 %;用纯化的锥鞭毛体糖结合物和复杂上鞭毛体抗原分别建立CLEIA ,检测未接种过疫苗也无其他感染者1 288 份血清,敏感性分别达到100 %和99. 7 %。Almeida 认为CLEIA 方法可用于人血库的筛查及治疗后病情和疫情的监察。

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