Magliulo 等^{[23 ]}建立了一个用来检测牛奶中的黄曲霉毒素M(1) 的快速和超灵敏的CLEIA。黄曲霉毒素M(1) 标准的基质是以牛奶为基础而配制的缓冲液,牛奶样品检测时不需要任何处理。本方法定量的极限为1 ppt ,批内和批间的精密性非常好,变异系数均小于9 % ,回收率的范围为96 %～122 %。本方法具有非常高的特异性,与其他的黄曲霉毒素不存在明显的交叉反应。应用CLEIA 和HPLC 检测了24 份牛奶样品, 结果具有很好的相关性( y =0.98 x + 1.71 , r2 = 0.98 , n = 24) 。Magliulo 认为CLEIA 非常适用于大量牛奶样品黄曲霉毒素M(1)的检测,检测的成本降低。

吴守芝等^{[24 ]}建立一种新的快速检出污染食品中肉毒毒素的简单方法,并应用于食物中肉毒毒素的检验。他们利用Western blot 结合化学发光技术以及密度分析方法,对食品中污染肉毒毒素及其型别、含量进行分析。建立的方法能快速检出食品中所污染肉毒毒素并能对毒素型别、含量进行分析,检出灵敏度可达1 pg/ ml ,在6 h 内能检出4 pg/ g 食品中的B 型肉毒毒素。3 种肉毒毒素与其各自抗体之间也未发现交叉免疫印迹反应。作者认为此法完全可用于食物中毒肉毒毒素的快速检验,灵敏度高,特异性好。

Rivera 等^{[25 ]}建立一个ECL 分析方法,用于检测人血清、人尿和某些食品(全牛奶、苹果汁、生牛肉和生鸡蛋) 中的肉毒梭菌毒素A、B、E 和F。不同类型的肉毒梭菌毒素的灵敏度不同,A 和E 型的灵敏度为50 pg/ ml ,B 型的灵敏度为100 pg/ ml ,而F 型为400 pg/ ml 。A 型的最低检测浓度为50 pg/ ml ,而B、E和F 的最低浓度为50～100 pg/ ml 。此系统与其他类型的肉毒梭菌毒素不存在交叉反应。本方法检测极限与金标准小鼠生物监测的水平相当,而且大大缩短了测量时间。Rivera 等认为此分析方法在临床医学、科学研究和食品中的肉毒梭菌毒素筛查方面有非常广的用途。

4. 展望

目前,兽医检测方法仍局限于传统的血清学方法,费时费力,难以适应兽医快速诊断的要求。国外陆续报道了化学发光免疫技术。化学发光酶免疫技术及电化学发光免疫技术等先进技术,都有更加广泛的应用前景,一旦方法成熟,其高灵敏度、高特异性将使兽医检测诊断的分析方法产生质的飞跃。食品分析检测的手段主要为毛细管气相色谱和高效液相色谱及其联用技术。现行标准的食品测定需要使用昂贵的大型分析仪器,而且需要通过有机溶剂提取、净化,前处理费时费力,无法进行随时随地的快速检测。

化学发光免疫分析技术在医学的临床应用已非常成熟,有取代放射免疫分析技术和酶联免疫分析技术而成为诊断市场上的主流产品的趋势。国外的化学发光免疫分析检测系统价格昂贵,难以得到普及;国内的化学发光免疫分析检测系统虽然价格较国外产品便宜很多,但是灵敏度和检测的可靠性得不到保证。研究者在如何提高免疫诊断的敏感性和特异性、发展新的分析体系和检测技术便携化等方面仍需要不断努力。

CLIA 分析方法灵敏度高,特异性强,方法多样,广泛地用于抗原、抗体和半抗原的免疫测定,其线性范围也较宽,符合生物医学和食品安全快速检测的需要,为生物医学和食品安全提供了一种超痕量的非同位素免疫检测手段。随着纳米磁性粒子技术、新型免疫反应增强剂和发光剂的研究开发,流动注射化学发光免疫分析法、毛细管电泳化学发光免疫分析法、高效液相色谱化学发光免疫分析法不断开发和完善,CLIA 在兽医学、医学、食品分析等方面将会有更广阔的应用前景。