3. 2 在医学上的应用:相对于兽医领域来讲,CLIA已广泛应用于基础和临床医学的各个领域,成为替代RIA 的首选技术。
Amersham 公司针对AmerliteTM发光增强酶免疫分析系统研制出的试剂盒项目有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素,与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮,以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。Amersham 公司虽然研制出这10 余种试剂盒,但因操作不够简便,检测项目仅限于蛋白质类大分子化合物,未能广泛应用于临床医学检测。
美国Ciba Corning 公司研制的ACS∶180 自动CLIA 系统能非常精确测量闪光。经过不断的改进,实现了ACS∶180CLIA 系统的全自动化,推出全新产品“ADVIA 系列”。现有检测项目47 项,更多的项目还在开发之中。主要有甲状腺系统、性腺系统、血液系统、肿瘤标记物、心血管系统、血药浓度及其他一些检测项目。
经过改良后,金刚烷衍生物在碱性磷酸酶作用下可发出高强度的辉光,光信号可持续1~2 h。随后国外生产厂家研制出以碱性磷酸酶为标记物的试剂盒, 与之相匹配的有DPC 的IMMULITE 全自动CLIA 系统和Beckman 的ACCESS 全自动微粒子CLIA系统。IMMULITE 全自动CLIA 系统可检测项目有心脏病、甲状腺功能、性腺激素、传染病、药物、血清学、血液病、成瘾药物、糖尿病、过敏检测和肿瘤标志物。ACCESS 全自动微粒子CLIA 系统主要可检测甲状腺功能、血液系统、内分泌激素、药物、肿瘤因子、心血管系统和糖尿病等项目。
目前商品化的ECL 分析系统只有Roche 公司的ECL 全自动分析系统。主要特点是本底信号极微,特异性更高,最小检出值可达1 pmol 以下,操作十分简便快速,是CLIA 优点较为集中的完美分析技术。已提供试剂盒的项目有肿瘤标志物、甲状腺功能、内分泌、传染病、心肌标志物和维生素类等项目。
3. 3 在食品分析上的应用:Lin 等[18 ]建立一个用来检测食品中氯霉素含量的CLEIA 系统。该系统的灵敏度、特异性、精密性和准确性都达到和超过了EIA 的水平,灵敏度达到0. 05 ng/ ml ,批间和批内的变异系数分别为小于8. 0 %和小于20 % ,方法回归分析为87 %~ 100 % , 稀释试验的相关系数r =0.999 ,检测范围为0. 1~10 ng/ ml 。Zhang 等[19 ]建立CLEIA 检测鸡肉中的氯霉素的含量,检测的极限是6 ng/ ml ,检测鸡肉中氯霉素的灵敏度比ELISA 法提高10 倍。当鸡肉中氯霉素含量达到0. 05~5μg/ kg时,CLEIA 检测值经回归为97 %~118 % ,变异系数为6 %~22 %。在作相关对比试验时,CLEIA 检测结果与气相色谱微孔板电子捕获检测结果相关性非常高。Zhang 认为此方法非常适合鸡肉样品中氯霉素的筛查。
Liang 等[20 ]报道,采用ECL 对牛奶中β2内酰胺类抗生素以及β2内酰胺酶进行了成功的检测。Pang等[21 ]也采用ECL 进行蜂产品中四环素类抗菌素残留的测定,方法是将三联吡啶钌[Ru (bpy) 2 +3 ]和三丙胺(TPA) 维持在电压1. 05 V、pH8. 0 的碳酸盐缓冲液,用来检测四环素和土霉素, 检测限分别为4. 0和3. 8 ng/ ml ,结果表明,这种方法的灵敏度高于所报道的绝大多数方法。
胥传来等[22 ]采用间接竞争CLEIA 对猪尿样中盐酸克伦特罗进行了检测,并与ELISA 进行比较。结果ELISA 虽然操作简单、快速,但其检出限一般只有0. 1μg/ L 左右,难以达到检测要求,且通常还需要进一步采用气相色谱-质谱(GC-MS) 或液相色谱-质谱(LC-MS) 等方法进行确证。而采用CLEIA 检测盐酸克伦特罗的灵敏度可达到0. 01μg/ L ,其线性范围为0. 04~25. 8μg/ L 。因此,CLEIA 比ELISA 具有更高的灵敏度。